[发明专利]一种日本血吸虫和破伤风双价口服或滴鼻疫苗

摘要

本发明提供了一种芽孢型益生菌粘膜疫苗的构建方法和免疫评价体系,提供了一种能表达病原生物外源性抗原的双转座表达载体和宿主菌，本发明还提供了一种融合表达细胞因子IL‑2的益生菌疫苗载体,本发明还提供了一种日本血吸虫疫苗和破伤风杆菌双价疫苗,以及一种日本血吸虫单价疫苗，所述益生菌疫苗以芽孢型枯草杆菌为口服或滴鼻途径的粘膜递送载体。本发明首次将日本血吸虫Sj26GST和破伤风TTFC等外源基因、细胞因子IL‑2与枯草芽孢粘膜免疫疫苗载体三者有机结合，优势互补。选用Sj26GST和TTFC为模式抗原，利用芽孢载体递送模式抗原，通过芽孢以及芽孢展示的重组IL‑2作为佐剂，调节免疫类型和增强免疫反应水平。

主权项

一种宿主菌，其特征在于，所述宿主菌通过以下方法制备而成：(1)将CotB基因启动子序列、CotB编码序列、连接体的核苷酸序列和IL‑2的核苷酸序列依次连接到第一表达载体，得到表达cotB‑linker‑IL2融合蛋白的第一重组表达载体；(2)在所述步骤(1)中第一重组表达载体插入片段外单酶切使得所述第一重组表达载体线性化，然后转化入第一芽孢杆菌感受态细胞，筛选得到表达CotB‑linker‑IL‑2融合蛋白的第一阳性株；(3)将CotC基因启动子序列、CotC编码序列和外源性模式基因Sj26GST‑TTFC的核苷酸序列依次连接到第二表达载体，得到表达CotC‑Sj26GST‑TTFC融合蛋白的第二重组表达载体；(4)在所述步骤(3)中第二重组表达载体插入片段外单酶切使得所述第二重组表达载体线性化，然后转化入第二芽孢杆菌感受态细胞,筛选得到表达CotC‑Sj26GST‑TTFC融合蛋白的第二阳性株；(5)抽提所述步骤(4)中表达CotC‑Sj26GST‑TTFC融合蛋白的第二阳性株的染色体，转化入由所述步骤(2)中表达IL‑2CotB‑linker‑IL‑2融合蛋白的第一阳性株制备的感受态细胞，筛选同时表达CotB‑IL2融合蛋白和CotC‑Sj26GST‑TTFC融合蛋白的阳性克隆，即得所述宿主菌。