[发明专利]一种日本血吸虫和破伤风双价口服或滴鼻疫苗

权利要求书

1.一种宿主菌，其特征在于，所述宿主菌通过以下方法制备而成：

(1)将CotB基因启动子序列、CotB编码序列、连接体的核苷酸序列和IL-2的核苷酸序列依次连接到第一表达载体，得到表达cotB-linker-IL2融合蛋白的第一重组表达载体；

(2)在所述步骤(1)中第一重组表达载体插入片段外单酶切使得所述第一重组表达载体线性化，然后转化入第一芽孢杆菌感受态细胞，筛选得到表达CotB-linker-IL-2融合蛋白的第一阳性株；

(3)将CotC基因启动子序列、CotC编码序列和外源性模式基因Sj26GST-TTFC的核苷酸序列依次连接到第二表达载体，得到表达CotC-Sj26GST-TTFC融合蛋白的第二重组表达载体；

(4)在所述步骤(3)中第二重组表达载体插入片段外单酶切使得所述第二重组表达载体线性化，然后转化入第二芽孢杆菌感受态细胞,筛选得到表达CotC-Sj26GST-TTFC融合蛋白的第二阳性株；

(5)抽提所述步骤(4)中表达CotC-Sj26GST-TTFC融合蛋白的第二阳性株的染色体，转化入由所述步骤(2)中表达IL-2CotB-linker-IL-2融合蛋白的第一阳性株制备的感受态细胞，筛选同时表达CotB-IL2融合蛋白和CotC-Sj26GST-TTFC融合蛋白的阳性克隆，即得所述宿主菌。

2.根据权利要求1所述的宿主菌，其特征在于，所述连接体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述的宿主菌，其特征在于，所述步骤(3)中Sj26GST-TTFC的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

4.根据权利要求1所述的宿主菌，其特征在于，所述步骤(1)中第一表达载体是质粒pDG364，所述步骤(3)中第二表达载体是质粒pDG1664。

5.根据权利要求1所述的宿主菌，其特征在于，所述步骤(2)中第一芽孢杆菌感受态细胞是枯草芽孢杆菌PY79感受态细胞，所述步骤(4)中第二芽孢杆菌感受态细胞是枯草芽孢杆菌PY79感受态细胞。

6.如权利要求1所述宿主菌在制备日本血吸虫和破伤风双价口服或滴鼻疫苗中的用途。

7.一种日本血吸虫和破伤风双价口服或滴鼻疫苗，其特征在于，所述日本血吸虫和破伤风双价口服或滴鼻疫苗含有由权利要求1-4任一所述的宿主菌培养而得的芽孢。