[发明专利]一种胎盘干细胞复合壳聚糖组织修复材料的制备方法

摘要

一种胎盘干细胞复合壳聚糖组织修复材料的制备方法，属于复合生物材料制备领域，包括胎盘绒毛膜来源间充质干细胞(CMSCs)体外培养、壳聚糖纳米膜的制备、胎盘绒毛膜来源间充质干细胞(CMSCs)的接种。本发明制得的胎盘干细胞复合壳聚糖组织修复材料取材的便利，不涉及社会伦理等问题，可以加快皮肤修复，具有优良的组织修复的功效。

主权项

一种胎盘干细胞复合壳聚糖组织修复材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：机械剥除胎盘羊膜组织，将剥离后剩下的绒毛组织，过质量浓度75％的酒精，再用PBS冲洗洗尽血渍，并将其剪成1mm2小块后，浸没于含有质量浓度0.1％的IV型胶原酶的低糖基础培养基中，37℃消化15‑45分钟,得细胞组织液；步骤二：细胞组织液经200目筛网过筛后转移至干净的离心管，1200rpm离心lOmin，弃上清液后接种于含有质量浓度10％的胎牛血清的低糖基础培养基中，于37℃、5％CO2的培养箱中培养5天后进行第一次换液，随后每隔两天进行换液，待细胞融合至90％使用质量浓度0.25％的胰酶进行消化，得胎盘绒毛膜来源间充质干细胞(CMSCs)；步骤三：称取0.2g壳聚糖，溶于40ml去离子水中，配制质量体积比为20％的壳聚糖溶液，另加入0.32g氯化钠晶体及0.5ml冰醋酸，调节pH至5.0混合搅拌均匀得壳聚糖溶液；步骤四：称取8g明胶，溶于40m1去离子水中，充分振荡后将溶液置于50℃水浴箱，待溶解后转入培养皿中，放入4℃冰箱，凝固后得固体凝胶；步骤五：将壳聚糖溶液加入固体凝胶表面，浸泡5‑7分钟，然后移出壳聚糖溶液，再加入清水浸泡1分钟，每浸泡一次壳聚糖溶液为1层，共做15层；将固体凝胶取出，放入装有37℃水的容器中，随着明胶基底逐渐熔化，其表面有薄膜析出，即得壳聚糖纳米膜；步骤六：取生长状况良好的胎盘绒毛膜来源间充质干细胞(CMSCs)接种于壳聚糖纳米膜上，接种时间为2‑12h，即得胎盘干细胞复合壳聚糖组织修复材料。