[发明专利]用于鲑鳟鱼苗种鉴定的生物传感检测方法

摘要

本发明公开了一种鲑鳟鱼苗种鉴定的生物传感检测方法，该方法基于公共数据库中不同株系来源的IHNV基因序列保守性分析结果，设计了以IHNV病毒基质蛋白(M)编码基因为扩增靶点的6条特异性引物，对待测鱼卵或鱼苗样品总RNA模板进行恒温逆转录扩增，扩增时间仅需15‑30min。扩增反应中全部或部分引物带有电化学活性标记，dNTP中部分带有锚定标记，因此成功扩增的病毒M基因序列同时带有电化学活性标记和锚定标记，能够利用锚定标记将扩增产物捕获在电极表面，通过检测电极表面的电化学信号，准确判定样品是否携带IHNV。本发明操作简单，反应迅速，对设备精密度要求低，适用于苗种场、养殖场等生产经营性场所的现场快速检测。

主权项

一种用于鲑鳟鱼苗种鉴定的生物传感检测方法，其特征在于，包括：步骤一、提取到待测鲑鳟鱼样品的RNA；步骤二、以所述RNA为模板，以如SEQ ID NO：1、2、3和4所示的核苷酸序列作为引物，且该引物中的至少一种引物上携带有电化学活性标记分子，构建逆转录环介导等温扩增体系，向该体系中添加部分带有锚定标记分子的dNTP，对待测鲑鳟鱼样品的RNA进行扩增，得到扩增反应液；步骤三、首先将所述扩增反应液加于修饰有锚定受体的电极表面进行锚定反应，之后检测所述电极表面是否存在所述电化学活性标记分子的电化学信号，若能够检测到所述电化学标记分子的电化学信号，表明所述待测鲑鳟鱼样品携带有IHNV。