[发明专利]一种以米粒作为培养基质的金针菇转化方法有效
| 申请号： | 201710198507.6 | 申请日： | 2017-03-29 |
| 公开（公告）号： | CN106957852B | 公开（公告）日： | 2020-11-06 |
| 发明（设计）人： | 刘建雨;尚晓冬;董慧;姜宁;宋春艳;谭琦;张丹;王瑞娟;李玉;周峰;于海龙;章炉军;张美彦;徐珍;杨慧;李巧珍 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院;上海炎地农业科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12N1/14;C12R1/645 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达;魏峯 |
| 地址： | 201106 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种以米粒作为培养基质的金针菇转化方法，包括：金针菇菌丝接种、农杆菌活化培养、农杆菌侵染米粒‑金针菇菌丝基质。本发明与现有的方法相比，操作方便，转化效率高，转化子易分离，具有良好的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 米粒 作为 培养 基质 金针菇 转化 方法 | ||
【主权项】：
一种以米粒作为培养基质的金针菇转化方法，包括：(1)将在固体培养基上培养的金针菇菌丝，带培养基一起挑入均质仪中，加入液体培养基，间歇打碎，得到液体菌丝；然后将液体菌丝接入米粒培养基中，20～25℃培养8‑10天，期间每天摇匀，至米粒变白；(2)将含有双元表达载体的农杆菌在含有相应抗生素的固体培养基上划线接种，28℃培养2～3天；再挑取单菌落接种于液体培养基中，28℃、180～220r/min培养至OD600＝0.5～0.6；然后取农杆菌菌液重悬于诱导培养基中，28℃、180～220r/min培养至OD600＝0.5～0.6；(3)取步骤(1)中的米粒加入至容器中，加入诱导培养基，超声、浸泡，吸掉上清液；其中，超声频率为40～60KHz，功率为140～160W，时间为1min～2min；浸泡时间为10～15min；(4)将步骤(2)中的农杆菌菌液加入步骤(3)中，超声、静置侵染，吸掉多余菌液，20～25℃培养72小时以上，期间每天摇匀；最后挑取单米粒转入诱导培养基平板，20～25℃培养7～10天，即可；其中，超声频率为40～60KHz，功率为140～160W，时间为10s～20s；静置侵染时间为20～30min。
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