[发明专利]一种测定玉兰亚属植物中玉米素的方法

摘要

本发明公开一种测定玉兰亚属植物中玉米素的方法，包括玉米素的提取步骤、标准溶液制备步骤、高效液相色谱分析步骤和标准溶液测定步骤，在玉米素的提取步骤中，使用低温研磨、低温避光浸提、PVPP萃取等方式，保证了玉米素的有效提取。本发明峰形更好，分离度高，无拖尾现象，重复性好，回收率高，准确可靠。

主权项

1.一种测定玉兰亚属植物中玉米素的方法，其特征在于，包括玉米素的提取步骤、标准溶液制备步骤、高效液相色谱分析步骤和标准溶液测定步骤；/n所述玉米素的提取步骤如下：/nA)采用液氮预冷的研钵低温研磨植物组织样品至粉末，随后加入4℃预冷的甲醇溶液，继续研磨成匀浆；/nB)将所述匀浆转入第一离心管中，第一低温避光浸提，1～4℃避光浸提15～21h；/nC)第一离心，1～4℃、10000～14000r/min离心8～12min，吸取第一上清液，在沉淀中加入低温甲醇溶液，第二低温避光浸提，1～4℃避光浸提1～3h；/nD)第二离心，1～4℃、10000～14000r/min离心8～12min，吸取第二上清液，合并第一上清液和第二上清液至第一鸡心瓶；/nE)向第一鸡心瓶中滴入氨水，35℃～40℃减压旋转蒸发至水相；/nF)将前述水相完全转移至第二离心管，向第二离心管中加入PVPP，常温摇床振荡15～25min后第三离心，10000～14000r/min离心8～12min；吸取第三上清液，并用PBS磷酸缓冲液调节pH至7.5～8.0，随后加入等体积PBS饱和的正丁醇萃取，重复操作本步骤1～3次；/nG)合并萃取液至第二鸡心瓶，减压浓缩至干；/nH)用初始流动相溶解后过微孔滤膜，得到样品待测液，低温保存；所述初始流动相为20％甲醇，80％0.1M乙酸水溶液；/n所述高效液相色谱分析步骤中，采用梯度洗脱，流动相A：甲醇，流动相B：0.1M乙酸水溶液，洗脱条件：0～3min，20％～20％A；3～8min，20％～30％A；8～11min，30％～30％A；11～16min，30％～50％A；16～25min，50～50％A；25～30min，50％～20％A，流速：1mL/min； 所述高效液相色谱分析步骤中：/n色谱条件为：/n色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18；进样量：10μL；柱温：40℃；检测波长：270nm；/n用外标法进行定量测定；/n所述玉兰亚属植物为红花玉兰或白玉兰；所述植物组织为红花玉兰花芽、花被片或叶片，或白玉兰的花被片或叶片。/n