[发明专利]一种测定玉兰亚属植物中玉米素的方法

权利要求书

1.一种测定玉兰亚属植物中玉米素的方法，其特征在于，包括玉米素的提取步骤、标准溶液制备步骤、高效液相色谱分析步骤和标准溶液测定步骤；

所述玉米素的提取步骤如下：

A)采用液氮预冷的研钵低温研磨植物组织样品至粉末，随后加入4℃预冷的甲醇溶液，继续研磨成匀浆；

B)将所述匀浆转入第一离心管中，第一低温避光浸提，1～4℃避光浸提15～21h；

C)第一离心，1～4℃、10000～14000r/min离心8～12min，吸取第一上清液，在沉淀中加入低温甲醇溶液，第二低温避光浸提，1～4℃避光浸提1～3h；

D)第二离心，1～4℃、10000～14000r/min离心8～12min，吸取第二上清液，合并第一上清液和第二上清液至第一鸡心瓶；

E)向第一鸡心瓶中滴入氨水，35℃～40℃减压旋转蒸发至水相；

F)将前述水相完全转移至第二离心管，向第二离心管中加入PVPP，常温摇床振荡15～25min后第三离心，10000～14000r/min离心8～12min；吸取第三上清液，并用PBS磷酸缓冲液调节pH至7.5～8.0，随后加入等体积PBS饱和的正丁醇萃取，重复操作本步骤1～3次；

G)合并萃取液至第二鸡心瓶，减压浓缩至干；

H)用初始流动相溶解后过微孔滤膜，得到样品待测液，低温保存；所述初始流动相为20％甲醇，80％0.1M乙酸水溶液；

所述高效液相色谱分析步骤中，采用梯度洗脱，流动相A：甲醇，流动相B：0.1M乙酸水溶液，洗脱条件：0～3min，20％～20％A；3～8min，20％～30％A；8～11min，30％～30％A；11～16min，30％～50％A；16～25min，50～50％A；25～30min，50％～20％A，流速：1mL/min； 所述高效液相色谱分析步骤中：

色谱条件为：

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18；进样量：10μL；柱温：40℃；检测波长：270nm；

用外标法进行定量测定；

所述玉兰亚属植物为红花玉兰或白玉兰；所述植物组织为红花玉兰花芽、花被片或叶片，或白玉兰的花被片或叶片。

2.根据权利要求1所述的测定玉兰亚属植物中玉米素的方法，其特征在于，所述标准溶液制备步骤具体是，准确称取ZT标准品0.0025g，用甲醇定容至10mL，配制成浓度为250mg/L的标准贮备液，密封后于-20℃低温避光保存；用移液器吸取一定量的标准贮备液，稀释成相当于原浓度1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256、1/512、1/1024的混合标准溶液，低温避光保存备用。

3.根据权利要求1所述的测定玉兰亚属植物中玉米素的方法，其特征在于，所述标准溶液测定步骤具体是，将ZT的标准贮备液分别在确定的色谱条件下进样，记录保留时间，从而定性；再将混合标准溶液在确定的色谱条件下重复进样3次，记录保留时间和峰面积，计算相对标准偏差；以各进样浓度为横坐标x，峰面积为纵坐标y，绘制标准工作曲线，计算回归方程及相关系数，从而定量。

4.根据权利要求1所述的测定玉兰亚属植物中玉米素的方法，其特征在于，所述低温甲醇溶液为预冷的甲醇溶液；所述甲醇溶液为体积分数为80％的甲醇溶液。

5.权利要求1所述的测定玉兰亚属植物中玉米素的方法，其特征在于，所述低温甲醇溶液为4℃预冷的体积分数为80％的甲醇溶液。

6.根据权利要求1所述的测定玉兰亚属植物中玉米素的方法，其特征在于，所述第一低温避光浸提为4℃避光浸提15～21h。

7.根据权利要求1所述的测定玉兰亚属植物中玉米素的方法，其特征在于，所述第二低温避光浸提为4℃避光浸提2h。

8.根据权利要求1所述的测定玉兰亚属植物中玉米素的方法，其特征在于，所述第一离心为4℃12000r/min离心10min。