[发明专利]一种测定玉兰亚属植物中玉米素的方法

说明书

本发明公开一种测定玉兰亚属植物中玉米素的方法，包括玉米素的提取步骤、标准溶液制备步骤、高效液相色谱分析步骤和标准溶液测定步骤，在玉米素的提取步骤中，使用低温研磨、低温避光浸提、PVPP萃取等方式，保证了玉米素的有效提取。本发明峰形更好，分离度高，无拖尾现象，重复性好，回收率高，准确可靠。

技术领域

本发明属于生物化学领域，涉及植物激素的定性定量分析技术，具体涉及玉兰亚属植物中内源激素的测定方法，特别是玉兰亚属中红花玉兰和白玉兰中玉米素(ZT)的测定方法。

背景技术

红花玉兰(Magnolia wufengensis L.Y.Ma et L.R.Wang)是2004年3月于湖北五峰发现的木兰科木兰属玉兰亚属新种，该玉兰花被片数为9(～11)片，内外全红且花色均匀的特征十分罕见。随后在该区域的调查中更是发现了玉兰花被片数为12、15、18、24等，甚至多达46片的野生类群，将与红花玉兰花色相近，花被片数目增多的类群正式命名为多瓣红花玉兰(Magnolia wufengensis var.multitepala L.Y.Ma et L.R.Wang)。随着红花玉兰新品种选育和繁殖工作的不断推进，红花玉兰苗木的产业化、商业化已成为必然趋势。植物内源激素如赤霉素(GA3)、生长素(IAA)、脱落酸(ABA)和玉米素(ZT)对植物的生长发育有重要的调节作用。了解掌握红花玉兰植物激素水平的变化规律是生产上通过施用植物生长调节剂改良观赏性状的理论基础。

植物激素在植物体内含量甚微，而且其在植物体内的组成复杂，相互共存的干扰组分多，对温度等条件敏感，因而对植物激素的测定比较困难。高效液相色谱(HPLC)是较理想的植物内源激素分析方法，植物激素的HPLC测定已在仁用杏花芽、甜樱桃、梨等果实，油菜、莴苣等籽粒上有所应用，对植物种子方面，主要集中在银杏、山楂、甜樱桃、五味子、早蜜梨和黄金梨等种子的激素含量测定上。目前，针对于玉兰亚属植物激素研究的报道较少，仍未建立起一种通用的植物激素测定方法。

在实现本发明过程中，发明人发现现有技术中至少存在如下问题：

1、不同种类植物内玉米素的高效液相色谱测定法中，其前处理方法、洗脱系统及检测系统差异十分明显，并不能直接借鉴其他植物的玉米素高效液相色谱测定法来测定玉兰亚属植物中玉米素特别是红花玉兰玉米素含量以及和白玉兰中玉米素含量。

2、红花玉兰幼嫩的植物组织，尤其是花芽在研磨过程中极易发生褐化，影响检查结果的准确性。

3、在前处理过程中，提取溶剂难以直接选择。在完成本发明的过程中，使用现有技术中的常规溶剂，会出现色素去除效果不理想的问题，萃取液乳化而不能分层的问题，待检测的玉米素离子化等问题，提取流程繁琐、提取效率低的问题。

4、待测样品组分复杂，极性很强，使用常规柱层析技术，色谱峰严重重叠，且有拖尾现象。

发明人在完成本发明的过程中，还发现玉兰亚属植物特别是红花玉兰和白玉兰中玉米素(ZT)与赤霉素(GA3)、生长素(IAA)、脱落酸(ABA)三种植物内源激素的前处理方法和柱层析方法，技术要求具有非常大的差异。本发明主要目的是检测玉兰亚属植物特别是红花玉兰和白玉兰中玉米素(ZT)的含量。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是克服现有技术中缺少玉兰亚属植物中植物激素测定方法特别是红花玉兰中玉米素(ZT)的测定方法以及白玉兰中玉米素(ZT)的测定方法的问题。

本发明所要解决的第二个技术问题是克服玉兰亚属植物特别是红花玉兰或白玉兰前处理方法中出现色素去除效果不理想的问题、萃取液乳化而不能分层的问题、待检测的玉米素离子化中至少一个问题。

本发明所要解决的第三个技术问题是克服在液相色谱中，色谱峰严重重叠的问题。