[发明专利]一种防治水稻稻瘟病的复合微生物菌剂及其制备方法

摘要

本发明涉及微生物技术领域，公开了一种防治水稻稻瘟病的复合微生物菌剂及其制备方法。本发明所述复合微生物菌剂包含保藏编号为CCTCC NoM 2016277的放线菌CZ1367的孢子，以及保藏编号为CCTCC NoM 2016276的短小芽胞杆菌WX812的菌体和芽胞。其中的放线菌和短小芽孢杆菌相配合协同防控稻瘟病菌，不仅弥补了彼此防效上的不足，而且避免使用化学农药，依然保证了对环境友好，无毒副作用，相比单一稻瘟病拮抗菌更加不易使病原菌产生抗药性。

主权项

一种防治水稻稻瘟病的复合微生物菌剂，其特征在于，包含浓度为1～50亿/g的保藏编号为CCTCC No：M 2016277的放线菌CZ1367的孢子粉，以及浓度为50～200亿/g的保藏编号为CCTCC No：M 2016276的短小芽胞杆菌WX812的菌体和芽胞；其中，所述放线菌CZ1367的孢子粉由以下方法制备获得：步骤1、将放线菌CZ1367接种到试管固体培养基斜面上，培养基配方为：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH值7.4，于28℃下培养7天，获得试管种；步骤2、先配制液体种子培养基，液体种子培养基配方为酵母膏4g，葡萄糖4g，麦芽膏10g，水1000ml，pH值7.2；在每个三角瓶中装入100ml液体培养基，121℃灭菌30分钟，冷却后接入1cm2所述试管种，28℃下于转速为200r/min震荡培养3天，获得种子液；步骤3、先配制固体发酵培养基，固体发酵培养基配方为麸皮1000g，121℃灭菌60分钟，冷却后烘干，以30％的接种量接入步骤2中得到的种子液，并补加无菌水，至含水量为50％，28℃下固体发酵7天，获得所述孢子粉；所述短小芽胞杆菌WX812的菌体和芽胞由以下方法制备获得：步骤1、将短小芽胞杆菌WX812接种到试管固体培养基斜面上，培养基配方为：NaCl 10g，蛋白胨10g，酵母粉5g，琼脂20g，水1000ml，pH 7.2，于30℃下培养1天，获得试管种；步骤2、先配制液体种子培养基，液体种子培养基配方为NaCl 10g，蛋白胨10g，酵母粉5g，水1000ml，pH7.2；在每个三角瓶中装入100ml液体培养基，121℃灭菌30分钟，冷却后接入1cm2所述试管种，30℃下于转速为200r/min震荡培养6‑8h，获得种子液；步骤3、先配制液体发酵培养基，液体发酵培养基配方为大豆粉2％，蔗糖1％，可溶性淀粉0.5％，蛋白胨0.2％，NaCl 0.2％，CaCO3 0.1％，MgSO4·7H2O 0.05％，KH2PO4 0.05％，pH7.0；121℃灭菌30分钟，冷却后接入2％的步骤2中得到的种子液，30℃下于转速为220rpm的发酵罐中培养3天得发酵液，用转速为4000rpm的离心机离心发酵液10分钟，取沉淀干燥，获得所述短小芽胞杆菌WX812的菌体和芽胞。