[发明专利]一种防治水稻稻瘟病的复合微生物菌剂及其制备方法

权利要求书

1.一种防治水稻稻瘟病的复合微生物菌剂，其特征在于，包含浓度为1～50亿/g的保藏编号为CCTCC No：M 2016277的放线菌CZ1367的孢子粉，以及浓度为50～200亿/g的保藏编号为CCTCC No：M 2016276的短小芽胞杆菌WX812的菌体和芽胞；

其中，所述放线菌CZ1367的孢子粉由以下方法制备获得：

步骤1、将放线菌CZ1367接种到试管固体培养基斜面上，培养基配方为：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH值7.4，于28℃下培养7天，获得试管种；

步骤2、先配制液体种子培养基，液体种子培养基配方为酵母膏4g，葡萄糖4g，麦芽膏10g，水1000ml，pH值7.2；在每个三角瓶中装入100ml液体培养基，121℃灭菌30分钟，冷却后接入1cm²所述试管种，28℃下于转速为200r/min震荡培养3天，获得种子液；

步骤3、先配制固体发酵培养基，固体发酵培养基配方为麸皮1000g，121℃灭菌60分钟，冷却后烘干，以30％的接种量接入步骤2中得到的种子液，并补加无菌水，至含水量为50％，28℃下固体发酵7天，获得所述孢子粉；

所述短小芽胞杆菌WX812的菌体和芽胞由以下方法制备获得：

步骤1、将短小芽胞杆菌WX812接种到试管固体培养基斜面上，培养基配方为：NaCl 10g，蛋白胨10g，酵母粉5g，琼脂20g，水1000ml，pH 7.2，于30℃下培养1天，获得试管种；

步骤2、先配制液体种子培养基，液体种子培养基配方为NaCl 10g，蛋白胨10g，酵母粉5g，水1000ml，pH7.2；在每个三角瓶中装入100ml液体培养基，121℃灭菌30分钟，冷却后接入1cm²所述试管种，30℃下于转速为200r/min震荡培养6-8h，获得种子液；

步骤3、先配制液体发酵培养基，液体发酵培养基配方为大豆粉2％，蔗糖1％，可溶性淀粉0.5％，蛋白胨0.2％，NaCl 0.2％，CaCO₃ 0.1％，MgSO₄·7H₂O 0.05％，KH₂PO₄ 0.05％，pH7.0；121℃灭菌30分钟，冷却后接入2％的步骤2中得到的种子液，30℃下于转速为220rpm的发酵罐中培养3天得发酵液，用转速为4000rpm的离心机离心发酵液10分钟，取沉淀干燥，获得所述短小芽胞杆菌WX812的菌体和芽胞。

2.权利要求1所述复合微生物菌剂在防治稻瘟病或制备防治稻瘟病农药制剂中的应用。

3.权利要求1所述复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括：

制备放线菌CZ1367的孢子和短小芽胞杆菌WX812的菌体和芽胞，然后调整两者的浓度混合，获得所述复合微生物菌剂；

其中，所述制备放线菌CZ1367的孢子步骤具体如下：

步骤1、将放线菌CZ1367接种到试管固体培养基斜面上，培养基配方为：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH值7.4，于28℃下培养7天，获得试管种；

步骤2、先配制液体种子培养基，液体种子培养基配方为酵母膏4g，葡萄糖4g，麦芽膏10g，水1000ml，pH值7.2；在每个三角瓶中装入100ml液体培养基，121℃灭菌30分钟，冷却后接入1cm²所述试管种，28℃下于转速为200r/min震荡培养7天，获得种子液；

步骤3、先配制固体发酵培养基，固体发酵培养基配方为麸皮1000g，121℃灭菌60分钟，冷却后烘干，以30％的接种量接入步骤2中得到的种子液，并补加无菌水，至含水量为50％，28℃下固体发酵7天，获得所述孢子粉；

所述制备短小芽胞杆菌WX812的菌体和芽胞步骤具体如下：

步骤1、将短小芽胞杆菌WX812接种到试管固体培养基斜面上，培养基配方为：NaCl 10g，蛋白胨10g，酵母粉5g，琼脂20g，水1000ml，pH 7.2，于30℃下培养1天，获得试管种；

步骤2、先配制液体种子培养基，液体种子培养基配方为NaCl 10g，蛋白胨10g，酵母粉5g，水1000ml，pH7.2；在每个三角瓶中装入100ml液体培养基，121℃灭菌30分钟，冷却后接入1cm²所述试管种，30℃下于转速为200r/min震荡培养6-8h，获得种子液；

步骤3、先配制液体发酵培养基，液体发酵培养基配方为大豆粉2％，蔗糖1％，可溶性淀粉0.5％，蛋白胨0.2％，NaCl 0.2％，CaCO₃ 0.1％，MgSO₄·7H₂O 0.05％，KH₂PO₄ 0.05％，pH7.0；121℃灭菌30分钟，冷却后接入2％的步骤2中得到的种子液，30℃下于转速为220rpm的发酵罐中培养3天得发酵液，用转速为4000rpm的离心机离心发酵液10分钟，取沉淀干燥，获得所述短小芽胞杆菌WX812的菌体和芽胞。