[发明专利]半胱氨酸荧光分析方法

摘要

本发明公开一种半胱氨酸荧光检测试剂盒,涉及基于纳米氧化铜双酶活性的半胱氨酸荧光检测方法及其试剂盒，本发明利用纳米氧化铜的模拟半胱氨酸氧化酶和过氧化物酶特性，提供了一种快速、简便、超灵敏的半胱氨酸检测新方法。所构建的检测试剂盒荧光背景低，测定选择性和灵敏度高，半胱氨酸检测线性范围为0.625‑100µmol/L，检测限为6.6 nmol/L。本发明可用于药物及血液样品中半胱氨酸的高灵敏测定。

主权项

1.一种测定半胱氨酸的荧光分析方法，其特征是在EP管中分别加入半胱氨酸溶液、磷酸盐缓冲液、对苯二甲酸、纳米氧化铜，温浴反应后，测定荧光，反应产物最大激发波长和荧光波长分别为315 nm和421 nm，荧光强度与半胱氨酸浓度相关，以测定半胱氨酸；具体步骤为，将0.5 mL浓度为20 mmol/L的对苯二甲酸，0.5 mL半胱氨酸和50 µL浓度为560 mg/L的纳米氧化铜加入到2.95 mL浓度为200 mmol/L 的pH为7的磷酸盐缓冲液中，混合摇匀后置于65 ℃温浴，10分钟后测定其在421 nm处的荧光强度，激发波长为315 nm；所使用的纳米氧化铜由以下方法制备而得：取0.02 mol/L的醋酸铜溶液150 mL和0.5 mL冰醋酸加入到装有冷凝管的三颈瓶中，搅拌加热至沸腾；快速加入0.04 g/mL的氢氧化钠溶液10 mL，加完后继续搅拌5分钟，得到黑色氧化铜沉淀；将反应得到的黑色氧化铜沉淀离心，用无水乙醇洗涤三次，减压干燥，得到纳米氧化铜粉体。/n