[发明专利]一种从外周血单个核细胞中大量扩增NK细胞的方法有效
| 申请号： | 201710151061.1 | 申请日： | 2017-03-14 |
| 公开（公告）号： | CN107022524B | 公开（公告）日： | 2019-10-22 |
| 发明（设计）人： | 李新峰;朱灏;张钰;周雁冰 | 申请（专利权）人： | 上海莱馥医疗科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达;魏峯 |
| 地址： | 201114 上海市闵*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种从外周血单个核细胞中大量扩增NK细胞的方法，包括：采集外周血的单个核细胞，先将单个核细胞放入被CD16单抗包被过的培养瓶中培养，培养基中加入IL‑2、IL‑15、OK432和灭活的自体血清；随后将细胞转入到没有被CD16单抗包被过的培养瓶中培养，培养基中加入IL‑2、IL‑15和灭活的自体血清；再把细胞转移到培养袋中培养，倒数第三天培养基中加入IL‑4继续培养，即得大量NK细胞。本发明不含动物血清和肿瘤细胞成分，从而很大程度上提高了NK细胞的安全性和可靠性，具有良好的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 外周血 单个 细胞 大量 扩增 nk 方法 | ||
【主权项】：
1.一种从外周血单个核细胞中大量扩增NK细胞的方法，包括：采集100～200ml患者外周血的单个核细胞，先将单个核细胞放入被CD16单抗包被过的培养瓶中培养，培养基中加入IL‑2、IL‑15、OK432和灭活的自体血清；随后将细胞转入到没有被CD16单抗包被过的培养瓶中培养，培养基中加入IL‑2、IL‑15和灭活的自体血清；再把细胞转移到培养袋中培养，倒数第三天培养基中加入IL‑4继续培养，总共培养21天以后即得大量NK细胞；其中，所述培养基为OpTmizer CST T‑cell expansion培养基；所述CD16单抗浓度为0.02mg/mL；第一次培养基中加入700U/mL IL‑2、100ng/mL IL‑15、0.01KE/mL的OK432和10％灭活的自体血清；第二次培养基中加入700U/mL IL‑2、100ng/mL IL‑15和10％灭活的自体血清；倒数第三天培养基中加入500U/mL IL‑4。
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