[发明专利]一种从血浆中制备人凝血酶原复合物的方法有效
| 申请号： | 201710118663.7 | 申请日： | 2017-03-01 |
| 公开（公告）号： | CN106676089B | 公开（公告）日： | 2020-01-10 |
| 发明（设计）人： | 蒋桂香;朱光祖;胡川;骆燕容;罗观文;洪好武;梁栋立 | 申请（专利权）人： | 广东双林生物制药有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/74 | 分类号： | C12N9/74 |
| 代理公司： | 44261 广州广信知识产权代理有限公司 | 代理人： | 张文雄 |
| 地址： | 524076 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种从血浆中制备人凝血酶原复合物的方法。本发明采用DEAE A‑50凝胶从血浆中直接吸附出人凝血酶原复合物，将吸附后的A‑50凝胶装填在固定床层析柱内，装填好的层析柱使用蠕动泵泵入洗脱液进行在线洗涤和洗脱，洗脱液经S/D灭活，固定床层析柱二次层析纯化得到高纯度人凝血酶原复合物产品。本发明的方法通过凝胶装柱在线洗脱实现了洗脱流量和速度的精确控制，减少了开放式操作引起的污染，交叉污染，凝胶泄漏等问题，所得制品纯度更高，IX因子效价可达27IU/ml以上，IX因子比活性达0.8IU/mg蛋白以上。同时采用带有压差控制器和固形物自动剥离系统的自冲洗型过滤器，使整个过滤过程中压差稳定可控，对凝胶颗粒起到了较好的保护作用，过滤过程中流入血浆罐的碎胶粒显著减少，生产过程中的凝胶损耗可降低20％以上。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 血浆 制备 凝血酶原 复合物 方法 | ||
【主权项】：
1.一种从血浆中制备人凝血酶原复合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)血浆冷沉淀的去除：以新鲜冷冻人血浆为原料，经融浆，混浆，连续离心工序去除血浆中的冷沉淀，得到无冷沉淀的血浆离心上清液；/n(2)凝胶批吸附：血浆温度控制在10-15℃，按照1.0-1.5g干凝胶/L血浆，向去冷沉淀血浆中加入平衡后的DEAE-sephadex A-50凝胶，搅拌吸附45min后关闭搅拌，静置沉降45min；凝胶吸附后的血浆使用带有压差控制器和固形物自动剥离系统的自冲洗型连续过滤器进行过滤，收集吸附后的A-50凝胶，血浆滤过液并入血浆罐；/n(3)装柱洗脱：将吸附后的A-50凝胶装填在固定床层析柱内，装填好的层析柱使用蠕动泵泵入洗涤液进行在线冲洗，洗涤液流速为30-40cm/h，冲洗时间60-90min；洗涤后的A-50凝胶使用蠕动泵泵入洗脱液进行在线洗脱，洗脱液流速为30-40cm/h，待在线紫外检测器中的紫外吸收值低于500Au后停止洗脱，收集洗脱液并使用0.45um滤芯过滤；/n(4)S/D灭活并稀释：温和搅拌下将配置好的S/D灭活液缓慢加入过滤后的洗脱液中，添加完毕后搅拌30min；调整液温为24-26℃，灭活6h；灭活后采取添加稀释液稀释的方法将电导值降至800-1000us；/n(5)固定床柱层析：将capto DEAE阴离子交换凝胶装填在固定床层析柱内，装填好的层析柱使用平衡液平衡2-5个柱体积，S/D灭活后的稀释液使用蠕动泵层析柱，上样流速为30-40cm/h；上样完成后使用蠕动泵泵入洗涤液进行在线冲洗，洗涤液流速为30-40cm/h，冲洗时间60-90min；洗涤后的层析柱使用蠕动泵泵入洗脱液进行洗脱，洗脱液流速为30-40cm/h，待在线紫外检测器中的紫外吸收值低于500Au后停止洗脱，收集洗脱液并使用0.45um滤芯过滤；/n(6)超滤浓缩：使用透析液进行超滤透析，使透析出液端口的电导值低于1000us后进行超滤浓缩，控制浓缩液效价>35IU/ml；/n(7)配液：超滤浓缩液使用透析液进行稀释，调节活力为30-40IU/ml，pH7-7.5，使用0.45um滤芯过滤；/n(8)分装；/n(9)冻干。/n
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