[发明专利]铜绿假单胞菌pyoS5基因敲除突变株及构建方法及应用在审
| 申请号： | 201710106794.3 | 申请日： | 2017-02-27 |
| 公开（公告）号： | CN106834199A | 公开（公告）日： | 2017-06-13 |
| 发明（设计）人： | 齐静;高阳;刘玉庆;杜以军;李璐璐;张庆;胡明;骆延波;张印 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/78;C12N15/03;A61K39/104;A61P31/04;C12R1/385;C12R1/19 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所37218 | 代理人： | 刘丽 |
| 地址： | 250100 *** | 国省代码： | 山东;37 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及基因工程菌株技术领域，特别涉及一种铜绿假单胞菌pyoS5基因敲除突变株，其在制备铜绿假单胞菌上减毒疫苗中具有重要应用。较野生株相比，到达对数生长期时间和生长速率没有明显差异，突变株不转录pyoS5基因，小鼠和水貂的致病性试验结果表明突变株的毒力明显下降，表明pyoS5参与了致病过程，是一种重要的毒力相关因子，该突变菌株为弱毒疫苗的制备提供了重要基础，可应用于铜绿假单胞菌减毒疫苗的开发。 | ||
| 搜索关键词： | 铜绿 假单胞菌 pyos5 基因 突变 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种铜绿假单胞菌pyoS5基因敲除突变株，其特征在于构建方法如下：（1）从铜绿假单胞菌细菌基因组上扩增pyoS5基因的上下游同源重组臂，同时克隆到pUC19质粒的多克隆位点区域，获得克隆pUC19‑ΔpyoS5；（2）将从pJQ200SK质粒上扩增得到的庆大霉素抗性基因Gm克隆到上下游同源臂间，获得pUC19‑ΔpyoS5::Gm质粒；（3）打靶片段上游同源臂‑庆大霉素抗性基因‑下游同源臂，经亚克隆转入自杀质粒pCVD442，获得打靶质粒pCVD442‑ΔpyoS5::Gm；（4）pCVD442‑ΔpyoS5::Gm转入大肠杆菌E.coli β2155，获得供体菌β2155/ pCVD442‑ΔpyoS5::Gm，与受体菌进行结合，经过培养、筛选获得pyoS5基因被Gm抗性基因取代的铜绿假单胞菌pyoS5基因敲除突变株。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于山东省农业科学院畜牧兽医研究所，未经山东省农业科学院畜牧兽医研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201710106794.3/，转载请声明来源钻瓜专利网。
