[发明专利]一种利用甘露糖制备甘露糖‑6‑磷酸的方法

摘要

本发明涉及一种利用甘露糖制备甘露糖‑6‑磷酸的方法。包括以下步骤(1)D‑甘露糖的制备；(2)配制反应液，将步骤(1)制得的D‑甘露糖、腺苷三磷酸钠盐和/或六偏磷酸钠、MgCl2溶解在去离子水中，用Tris‑Hcl缓冲液调节pH值；其中D‑甘露糖浓度为300‑800mmol/L，腺苷三磷酸钠盐和/或六偏磷酸钠浓度为500‑1500mmol/L，MgCl2浓度为10‑100mmol/L，pH值为4‑9；(3)加入己糖激酶混合，然后将其置于反应温度15‑50℃的摇床上反应，100rpm震荡温育使之进行转化反应5‑48小时；(4)加入活性炭脱色，过滤；(5)加入KOH，然后利用SSMB进行分离提纯，浓缩，干燥即得。通过对D‑甘露糖制备工艺参数，酶促反应合成甘露糖‑6‑磷酸工艺参数的优化，使得原料选择更加简单，合成效率更高，甘露糖‑6‑磷酸的纯度达到99%以上。

主权项

一种利用甘露糖制备甘露糖‑6‑磷酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)D‑甘露糖的制备：a.将摩尔比(1‑10)：(1‑2)葡萄糖和果糖用纯化水稀释到浓度25‑65％(质量)，加入催化剂钼酸盐，所述钼酸盐与葡萄糖和果糖质量之和的比值为0.1‑1：50，在50‑110℃的真空条件下进行差向异构，得到的异构葡萄糖、果糖、甘露糖混合液；b.将步骤a得到的葡萄糖、果糖、甘露糖的混合液，进行脱盐精制后进入模拟移动床进行分离提纯，得到富含甘露糖的组分A和其他组分B；将其他组分B返回到步骤a进行差向异构；c将步骤b得到的富含甘露糖的组分A，进行一次蒸发然后加入活性炭进行脱色，经脱色处理后，进行二次蒸发，得到料液，该料液进行水相结晶，结晶过程中的降温梯度控制：0～6小时，每小时降0.5‑1℃；7～18小时，每小时降1‑2℃；19小时以后，每小时降0.5‑1℃，直至降至20～30℃，结晶后经离心精制，得到粗品结晶D‑甘露糖，以20‑40％的无水乙醇对粗D‑甘露糖进行15‑60分钟浸泡精制，干燥后得到D‑甘露糖成品；(2) 配制反应液，将步骤(1)制得的D‑甘露糖、腺苷三磷酸钠盐和/或六偏磷酸钠、MgCl2溶解在去离子水中，用Tris‑Hcl缓冲液调节pH值；其中D‑甘露糖浓度为300‑800mmol/L，腺苷三磷酸钠盐和/或六偏磷酸钠浓度为500‑1500mmol/L，MgCl2浓度为10‑100mmol/L，pH值为4‑9；(3)加入己糖激酶混合，然后将其置于反应温度15‑50℃的摇床上反应，100rpm震荡温育使之进行转化反应5‑48小时；(4)加入活性炭脱色，过滤；(5)加入KOH，然后利用SSMB进行分离提纯，浓缩，干燥即得。