[发明专利]一种RNA反义纯化方法

摘要

本发明涉及一种RNA反义纯化方法。所述方法包含以下步骤S1、细胞的交联、裂解及基因组DNA的消化，得到RNA样品；S2、探针组溶液的制备；S3、磁珠预处理；S4、探针组‑磁珠复合物的制备；S5、反义纯化；S6、RNA的洗脱；S7、RNA的纯化。本发明通过预先使用BSA和寡核苷酸随机引物封闭磁珠，降低了磁珠的非特异性吸附。本发明中磁珠首先与探针孵育，去除多余探针后再与RNA孵育，过量探针封闭链霉亲和素与蛋白质、核酸等的非特异性结合，提高检测特异性，灵敏度高；杂交后经梯度温度多次洗涤，保证磁珠充分结合探针并结合目标RNA，提高杂交效率。

主权项

一种RNA反义纯化方法，其特征在于，包含以下步骤：S1、细胞的交联、裂解及基因组DNA的消化，得到RNA样品；S2、探针组溶液的制备：将生物素标记的各探针溶解后混合，于85℃变性3min，快速转移冰浴，得到探针组溶液；S3、磁珠预处理：使用BSA和寡核苷酸随机引物封闭链霉亲和素标记的磁珠；S4、探针组‑磁珠复合物的制备：将探针组溶液加入到预处理后的磁珠中，得到探针组‑磁珠复合物；S5、反义纯化：向RNA样品中加入探针组‑磁珠复合物，65℃变性10min，37℃、42℃和45℃各洗涤2次，每次洗涤5min，得到RNA‑探针组‑磁珠复合物；S6、RNA的洗脱：将RNA‑探针组‑磁珠复合物加入RNA ElutionBuffer混匀，95℃加热2min，收集上清，向上清中加入Proteinase K Buffer和Proteinase K，温育消化得到洗脱后的RNA；S7、RNA的纯化：向洗脱后的RNA中加入等洗脱体积的苯酚‑氯仿‑异戊醇混合液混匀，离心收集上层水相，向水相中加入5M NaCl溶液、glycogen和无水乙醇，混匀后‑80℃沉淀1～16h，离心弃上清，加入预冷的80％乙醇，离心弃上清，室温静置风干，加入无RNase水，65℃温育15min。