[发明专利]一种经由细胞片层获得磷酸钙/细胞外基质薄膜的方法

摘要

本发明公开了一种经由细胞片层获得磷酸钙/细胞外基质薄膜的方法，细胞外基质的来源为成纤维细胞、成骨细胞等。制备该薄膜主要通过在TiO2纳米点薄膜基板上进行高密度培养细胞，形成细胞片层后，通过光致细胞脱附，获得一层完整的细胞片层，将其清洗后再进行固定、复合、干燥处理后得到磷酸钙细胞外基质薄膜。本发明的细胞外基质薄膜，可应用于组织工程等领域。此外本发明的制备方法，工艺简单，易于实现，有利于进行推广应用。

主权项

一种经由细胞片层获得磷酸钙/细胞外基质薄膜的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)对可光致细胞脱附的细胞培养表面进行灭菌处理；(2)将事先培养在培养瓶中的细胞进行脱壁处理，以800～1300r/min离心2～6min后，用DMEM培养基混悬，并用计数器计数，以1×105～1×106细胞密度将细胞接种于上述细胞培养表面上，置于二氧化碳培养箱内进行单层高密度培养，2～4天后进行第一次换液，之后每2～3天换液一次，整个培养周期5～10天，最终在细胞培养表面上形成完整的细胞片层；(3)通过波长长于350nm的紫外光或可见光光照5～30min，使细胞片层从细胞培养表面上完整脱附，获得一层完整的细胞片层，用PBS缓冲液以及去离子水反复清洗，用固定剂对细胞片层进行固定，避光处理30～60min；(4)将细胞片层浸泡在0.01～0.06mol/L的氢氧化钙溶液中1～10分钟，取出后在‑55℃冷冻30分钟，取出后在20～37℃解冻；上述冷冻‑解冻循环重复3～10次；之后用PBS缓冲液冲洗，最后用去离子水清洗，最终获得一层磷酸钙/细胞外基质薄膜。