[发明专利]一种聚肽的快速检测方法

摘要

本发明涉及生化分析领域，具体公开了一种聚肽的快速检测方法，本发明将离子交换柱应用于HPLC仪器平台，取微量样品就能快速检测供试品中的聚肽，包括步骤：取发酵或纯化过程中的样品配制供试品溶液，色谱柱以阴离子交换树脂为填料，以磷酸盐缓冲液或Tris‑HCl缓冲液为洗脱液A，以NaCl溶液或KCl溶液为洗脱液B，梯度洗脱，使聚肽可以和杂蛋白、核酸等杂质很好地分离。本发明的检测方法具有较好的线性范围、重复性和加样回收率，较低的检测限，操作简单，灵敏度高，能快速检测供试样品中的聚肽。

主权项

1.一种聚肽的快速检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)样品溶液的配制：取发酵液或发酵菌体破碎液或纯化中间过程溶液适量，过0.22μm滤膜；(2)样品的测定：采用高效液相离子交换色谱法，以10‑30mM的Na₂HPO₄‑NaH₂PO₄缓冲溶液或K₂HPO₄‑KH₂PO₄缓冲溶液或Tris‑HCl缓冲溶液作为洗脱液A，调pH至7.5‑8.5，以洗脱液A为溶剂配制1‑3M的NaCl溶液或KCl盐溶液为洗脱液B；所述离子交换色谱条件为：填料Q Sepharose^TM FF装填于空管柱或使用预装柱；柱温：25℃；进样量：10μL；流速：0.1‑2mL/min；洗脱方式：0‑10min，100％A等度洗脱；10‑25min，洗脱液A:洗脱液B为90:10；25‑45min，洗脱液A:洗脱液B为80:20；45‑60min，洗脱液A:洗脱液B为70:30；60‑80min，100％B等度洗脱，之后通过双波长紫外检测器检测；(3)含量分析；其中，所述聚肽为盐型阴离子聚肽，所述盐型阴离子聚肽包括α‑聚谷氨酸、γ‑聚谷氨酸、聚天冬氨酸以及由谷氨酸和天冬氨酸所形成的聚肽的盐。