[发明专利]一种高灵敏度的OsHV‑1实时荧光定量PCR检测试剂盒及方法

摘要

本发明提供了一种用于检测牡蛎疱疹病毒OsHV‑1的试剂盒和方法。所述的试剂盒包括一种检测牡蛎疱疹病毒OsHV‑1的引物组和荧光探针；所述的引物组由四条引物组成，用于巢氏扩增牡蛎疱疹病毒OsHV‑1的特定DNA片段。本发明提供的检测方法使得四条引物和一条荧光探针在一管中通过一步扩增即可完成巢氏扩增和实时荧光定量PCR，用于检测牡蛎疱疹病毒OsHV‑1。本发明提供了一种兼具高灵敏度、特异性、准确性的OsHV‑1实时荧光定量PCR检测方法及试剂盒，能够实现对牡蛎及养殖牡蛎的水体进行快速检测，应用极为方便，基于上述优点，该试剂盒适合在水产养殖单位和水产养殖品监管部门等进行推广应用，具有广泛的应用前景。

主权项

一种用于检测牡蛎疱疹病毒OsHV‑1的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括引物组和荧光探针；所述的引物组由引物OsHV‑ F1、引物OsHV‑R1、引物OsHV‑F2和引物OsHV‑R2组成；所述的引物OsHV‑F1的序列为SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；所述的引物OsHV‑R1的序列为SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列；所述的引物OsHV‑F2的序列为SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列；所述的引物OsHV‑R2的序列为SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列；所述的荧光探针为荧光探针OsHV‑P，荧光探针OsHV‑P为TaqMan探针，所述的荧光探针OsHV‑P序列为SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列；所述的荧光探针OsHV‑P的核苷酸序列的5’端连接荧光基团FAM，3’端连接猝灭基团BHQ1；所述的试剂盒的使用方法为：从待测样品中提取病毒DNA为模板，利用引物OsHV‑F1、引物OsHV‑R1、引物OsHV‑F2、引物 OsHV‑R2和荧光探针OsHV‑P，通过以下PCR扩增程序进行实时荧光定量PCR：94～96℃预变性2分钟；94～95℃变性15～30秒、65～69℃退火30～75 秒、68～72℃延伸30～40秒，6～9个循环；93～95℃变性15～20秒、60℃退火30秒、68～72℃ 延伸30秒，8个循环；93～95℃变性15秒、52～55℃退火延伸30～60秒，40个循环；55℃时收 集荧光并判定结果。