[发明专利]一种基于细胞层面进行全蛋白质组学分析的方法有效
| 申请号： | 201611190958.7 | 申请日： | 2016-12-21 |
| 公开（公告）号： | CN108226317B | 公开（公告）日： | 2020-10-20 |
| 发明（设计）人： | 陆豪杰;熊云;张莹 | 申请（专利权）人： | 复旦大学 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N27/62 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属蛋白质分析领域，涉及基于细胞层面的全蛋白质组学分析的方法，本发明中，收集的细胞直接通过吸胀的方式进入真空干燥后的聚丙烯酰胺凝胶粒中，然后直接进行胶内酶解获得质谱分析所需的肽段；本方法中不需要单独的细胞裂解和蛋白提取步骤，使四个基本步骤减少为两步，在不提高酶量的情况下，实验耗时明显缩短；本方法与传统方法比较，在细胞蛋白质组鉴定，尤其是高分子量蛋白的鉴定上存在明显优势；本发明方法步骤简单、操作方便、快速高效，可以实现同时进行细胞裂解和蛋白酶解，为高灵敏质谱分析提供样品保证；由于摆脱了对去垢剂的依赖，适用于后续诸多翻译后修饰的研究。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 细胞 层面 进行 蛋白质 分析 方法 | ||
【主权项】：
1.一种基于细胞层面进行全蛋白质组学分析的方法，其特征在于，其包括步骤：制备聚丙烯酰胺凝胶；收集细胞样品，用PBS缓冲液洗2次；将细胞溶液与真空干燥的凝胶颗粒混合，冰浴静置；对样品进行冷热交替处理2次后，用50%乙腈和100%乙腈各洗2次；对样品进行DTT还原和IAA烷基化处理；对样品进行胰酶酶解；提取酶解肽段用于后续LC‑MS/MS分析。
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