[发明专利]一种基于细胞层面进行全蛋白质组学分析的方法

权利要求书

1.一种直接在细胞层面进行蛋白酶解的细胞全蛋白质组学分析方法，其特征在于，当细胞溶液被加入到含真空干燥的凝胶颗粒的离心管中，溶液中的细胞通过吸胀的方式进入凝胶颗粒中，嵌入在凝胶颗粒中的细胞蛋白直接被胰酶酶解成肽段，而后送入质谱进行检测；其包括步骤：

（1）制备聚丙烯酰胺凝胶；

（2）收集细胞样品，用PBS缓冲液洗2次；

（3）将细胞溶液与真空干燥的凝胶颗粒混合，冰浴静置；

（4）对样品进行冷热交替处理2次后，用50%乙腈和100%乙腈各洗2次；

（5）对样品进行DTT还原和IAA烷基化处理；

（6）对样品进行胰酶酶解；

（7）提取酶解肽段用于后续LC-MS/MS分析。

2.按权利要求1所述的方法，其特征是，（3）中所述细胞溶液所用的缓冲液为：含蛋白酶抑制剂的25 mM的碳酸氢铵水溶液。

3.按权利要求1所述的方法，其特征是，（1）中的聚丙烯酰胺凝胶体积为50微升，所需的试剂包括：30微升25 mM的碳酸氢铵溶液，16.7微升含30%丙烯酰胺/双丙烯酰胺的水溶液，其中丙烯酰胺与双丙烯酰胺的质量比为29:1，2.5微升浓度为1%的过硫酸铵，0.05微升四甲基乙二胺。

4.按权利要求1所述的方法，其特征是，（1）中所制备凝胶切割至大约1 mm³大小的均匀颗粒，然后进行真空干燥。

5.按权利要求1所述的方法，其特征是，（3）中冰浴静置时间为5~10分钟。