[发明专利]一种树脂固定海藻糖合酶催化麦芽糖产海藻糖的方法

摘要

本发明公开了一种树脂固定海藻糖合酶催化麦芽糖产海藻糖的方法。本发明将海藻糖合酶用树脂进行固定实现重复利用。载体为带环氧基团的树脂，海藻糖合酶上氨基与树脂上的环氧基通过共价键结合。固定化酶初始转化率为58％左右，与游离酶基本一致，循环到18批时，转化率基本还可以保持在初始转化率的72％左右。循环到14批时，转化率基本还可以保持在初始转化率的80％左右。固定化酶催化质量百分比浓度为20％的麦芽糖底物生成海藻糖，该底物浓度较高，可工业化应用。固定化酶相比于游离酶，副产物葡萄糖量减少。固定化酶初始可达到与游离酶相同的转化率，另外可重复使用一定批次，节省成本，直接使用粗酶进行固定化，固定化方法简便易行，具有工业化应用前景。

主权项

1.一种树脂固定海藻糖合酶催化麦芽糖产海藻糖的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)树脂的选择及预处理载体为西安蓝晓公司的LX‑1000EP带环氧基团的树脂；称100g载体加入400ml，0.1M，pH为8的磷酸缓冲液，室温下200rpm搅拌15min，测pH值，维持pH在7.8‑8.2，1h后过滤抽干得到活化后的树脂；(2)酶的固定化将带有海藻糖合酶目的基因的大肠杆菌进行发酵，离心后得到菌体，加入体积为发酵液体积1/5的PBS将菌体重悬，超声破碎后得到细胞破碎液，用细胞破碎液进行固定化；固定化方法为：称取活化后的树脂0.4g，在10ml磷酸缓冲液体系中加入1ml细胞破碎液，室温条件下，150rpm摇床振荡进行固定化；固定化5‑6h后抽滤，固体物质即为固定化酶，负载量为70‑80％；(3)固定化酶反应20ml的质量百分比浓度为20％的麦芽糖底物中加入0.4g固定化酶，在50℃摇床中150rpm反应24h；所用海藻糖合酶序列为NO.1。