[发明专利]一种用大蒜花序轴进行脱毒快繁的方法及应用

摘要

本发明公开了一种用大蒜花序轴进行脱毒快繁的方法。主要采用大蒜花序轴为外植体诱导不定芽，然后将不定芽诱导成试管鳞茎，通过低温驯化后的试管鳞茎栽培到土壤中获得脱毒种蒜的完整体系。每个花序轴诱导的不定芽数可以达到11个；诱导试管鳞茎的培养基为：MS+120g·L^‑1绵白糖+6.8 g·L^‑1琼脂，pH=7.5。本发明以宝坻大蒜“六瓣红”花序轴为外植体，通过高频诱导试管鳞茎、试管鳞茎低温春化、优化栽培条件等技术环节，构建了大蒜脱毒快繁完整方法，不定芽诱导试管鳞茎的诱导率最高可达到98.78%，而每个花序轴诱导的试管鳞茎数最高可达到10.64个，其繁殖系数相对于鳞茎直接种植高了2倍多。为提高大蒜脱毒快繁效率、节省培育时间、降低生产成本提供了技术保障。

主权项

1.一种用大蒜花序轴进行脱毒快繁的方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1）花序轴诱导不定芽：选择宝坻大蒜“六瓣红”，大蒜进入生殖生长期，其花茎：假茎=1‑1.2时，采摘大蒜的花序轴并于4℃中保存两周，将经低温储存两周后的花序轴置于自来水下冲洗30 min，用质量分数为0.1% HgCl2 消毒20 min，蒸馏水冲洗3‑4次，再用质量份分数为75%的酒精消毒10 min，蒸馏水冲洗3‑4次；剥下外层苞叶及表面退化的花原基残留物和膜质苞片，并去除花茎部分，将花序轴接入不定芽诱导培养基中，每瓶接入2个花序轴；诱导不定芽的培养基为: MS+2.0 mg L‑1 KT+0.1 mg L‑1 NAA+ 30.0 g· L‑1 蔗糖+7.5 g ·L‑1 琼脂，pH=6.2；（2）不定芽诱导试管鳞茎：花序轴生长六周后，形成的不定芽高度达到3‑5cm时，将其接入试管鳞茎诱导培养基中诱导试管鳞茎，诱导试管鳞茎的培养基为：MS+120 g· L‑1绵白糖+6.8 g· L‑1琼脂，pH=7.5;（3）试管鳞茎的收获与储藏：不定芽在诱导试管鳞茎的培养基中诱导六周后，试管鳞茎成熟，将其取出并洗去培养基，在避光处晾干，晾干后，在4℃下保存3周后种植；（4）再生植株和再生鳞茎的获得：试管鳞茎度过休眠期后，于10月底种植，覆膜，第二年5月份，揭开薄膜，并进行除草，浇水以及松土工作，在6月下旬，组培大蒜成熟并收获；（5）组培大蒜病毒检测和染色体检测： 利用酶联免疫技术和根尖细胞染色体制片技术分别检测组培大蒜脱毒效果和染色体变异情况。