[发明专利]单羽火筒树抗癌活性部位LA-D及其药物组合物和其化学成分分离和鉴定方法

摘要

提供单羽火筒树[九节狸，Leea asiatica(Linnaeus)Ridsdale]抗癌活性部位LA‑D及其中的化学成分的提取和鉴定方法，以及，以该活性部位组成的药物组合物，以及它们在制备治疗肿瘤的药物中的应用。本发明采用色谱柱层析及半制备高效液相色谱的分离方法，以及质谱和核磁共振波谱的鉴定方法，从LA‑D中分离、鉴定出了山奈酚、山萘酚‑3‑O‑α‑L‑吡喃鼠李糖苷、槲皮素、异槲皮苷、槲皮素‑3‑O‑α‑L‑吡喃鼠李糖苷、杨梅素、杨梅素‑3‑O‑α‑L‑吡喃鼠李糖苷、Europetin、Europetin 3‑O‑α‑L‑rhamnopyranoside和(‑)‑儿茶素和山楂酸。本发明首次阐明LA‑D的主要化学成分，通过提供的方法，可以简单、快速地从单羽火筒树及其抗癌活性部位LA‑D中获取上述化学成分，用于建立单羽火筒树及其抗癌活性部位LA‑D的质量控制标准。

主权项

1.单羽火筒树提取物乙酸乙酯萃取部位LA‑D的化学成分分离及制备方法，其特征在于该方法包括下述步骤：单羽火筒树干燥全株粉碎后用甲醇冷浸7天，过滤，滤渣继续提取，总共提取4次，合并滤液，回收溶剂，得浸膏，将浸膏用水制成混悬液，分别用石油醚、氯仿和乙酸乙酯萃取，回收溶剂获得石油醚部分、氯仿部分、乙酸乙酯部分，乙酸乙酯部分为LA‑D，所述的LA‑D中化学成分山奈酚、山萘酚‑3‑O‑a‑l‑吡喃鼠李糖苷、槲皮素、异槲皮苷、槲皮素‑3‑O‑a‑l‑吡喃鼠李糖苷、杨梅素、杨梅素‑3‑O‑a‑l‑吡喃鼠李糖苷、Europetin、Europetin 3‑O‑a‑l‑吡喃鼠李糖苷、(‑)‑儿茶素和山楂酸的总含量以重量百分比计，占LA‑D的10‑95%，所述的LA‑D中化学成分山奈酚、山萘酚‑3‑O‑a‑l‑吡喃鼠李糖苷、槲皮素、异槲皮苷、槲皮素‑3‑O‑a‑l‑吡喃鼠李糖苷、杨梅素、杨梅素‑3‑O‑a‑l‑吡喃鼠李糖苷、Europetin、Europetin 3‑O‑a‑l‑吡喃鼠李糖苷、(‑)‑儿茶素和山楂酸是从单羽火筒树乙酸乙酯部位LA‑D分离得到，步骤为：（1）LA‑D经硅胶柱层析用20:1，15:1，10:1，5:1，3:1，1:1的氯仿‑甲醇混合溶剂梯度洗脱划段，得到Fr.A1、Fr.A2、Fr.B1、Fr.B2、Fr.C、Fr.D、Fr.E、Fr.F、Fr.G、Fr.H共10个部分；（2）取Fr.A1部分经C18反相硅胶柱层析，10:90→100:0的甲醇‑水，得到80%甲醇洗脱部分纯化得到化合物山楂酸；（3）取Fr.B1部分经C18反相硅胶柱层析，10:90→100:0的甲醇‑水，得到5%甲醇洗脱部分，过LH‑20凝胶柱层析，甲醇洗脱后得到B1‑2‑3和B1‑2‑5两个主要部分，B1‑2‑3经半制备高效液相色谱纯化得到山奈酚、山萘酚‑3‑O‑a‑l‑吡喃鼠李糖苷、Europetin和Europetin 3‑O‑a‑l‑吡喃鼠李糖苷；B1‑2‑5经半制备高效液相色谱纯化得到(‑)‑儿茶素；（4）取Fr.B2部分和Fr.C部分合并后经C18反相硅胶柱层析，10:90→100:0的甲醇‑水，得到15%和20%甲醇洗脱部分，15%甲醇洗脱部分用半制备高效液相色谱纯化得到异槲皮苷；20%甲醇洗脱部分经LH‑20凝胶柱层析得到槲皮素、杨梅素‑3‑O‑a‑l‑吡喃鼠李糖苷和一个混合物，后者经半制备高效液相色谱纯化得到杨梅素；（5）取Fr.D部分和Fr.E部分合并后经C18反相硅胶柱层析，10:90→100:0的甲醇‑水，得到40%甲醇洗脱部分，40%甲醇洗脱部分经LH‑20凝胶层析柱得到槲皮素‑3‑O‑a‑l‑吡喃鼠李糖苷；其中，（3）所述B1‑2‑3的半制备高效液相色谱是用安捷伦1200液相色谱仪，Ultimate AQ‑C18色谱柱，色谱柱大小4.6×300mm，洗脱剂为甲醇‑水，含0.05%三氟乙酸，比例40:60，流速2mL/min；B1‑2‑5的半制备高效液相色谱是用安捷伦1200液相色谱仪，Ultimate AQ‑C18色谱柱，色谱柱大小4.6×300mm，洗脱剂为甲醇‑水，含0.05%三氟乙酸，比例15:85，流速2mL/min；（4）所述15%甲醇洗脱部分的半制备高效液相色谱是用安捷伦1200液相色谱仪，Ultimate AQ‑C18色谱柱，色谱柱大小4.6×300mm，洗脱剂为甲醇‑水，含0.05%三氟乙酸，比例15:85，流速2mL/min；20%甲醇洗脱部分的半制备高效液相色谱是用安捷伦1200液相色谱仪，Ultimate AQ‑C18色谱柱，色谱柱大小4.6×300mm，洗脱剂为甲醇‑水，含0.05%三氟乙酸，比例30:70，流速2mL/min。