[发明专利]单羽火筒树抗癌活性部位LA-D及其药物组合物和其化学成分分离和鉴定方法

权利要求书

1.单羽火筒树提取物乙酸乙酯萃取部位LA-D的化学成分分离及制备方法，其特征在于该方法包括下述步骤：单羽火筒树干燥全株粉碎后用甲醇冷浸7天，过滤，滤渣继续提取，总共提取4次，合并滤液，回收溶剂，得浸膏，将浸膏用水制成混悬液，分别用石油醚、氯仿和乙酸乙酯萃取，回收溶剂获得石油醚部分、氯仿部分、乙酸乙酯部分，乙酸乙酯部分为LA-D，所述的LA-D中化学成分山奈酚、山萘酚-3-O-a-l-吡喃鼠李糖苷、槲皮素、异槲皮苷、槲皮素-3-O-a-l-吡喃鼠李糖苷、杨梅素、杨梅素-3-O-a-l-吡喃鼠李糖苷、Europetin、Europetin3-O-a-l-吡喃鼠李糖苷、(-)-儿茶素和山楂酸的总含量以重量百分比计，占LA-D的10-95%，所述的LA-D中化学成分山奈酚、山萘酚-3-O-a-l-吡喃鼠李糖苷、槲皮素、异槲皮苷、槲皮素-3-O-a-l-吡喃鼠李糖苷、杨梅素、杨梅素-3-O-a-l-吡喃鼠李糖苷、Europetin、Europetin 3-O-a-l-吡喃鼠李糖苷、(-)-儿茶素和山楂酸是从单羽火筒树乙酸乙酯部位LA-D分离得到，步骤为：

（1）LA-D经硅胶柱层析用20:1，15:1，10:1，5:1，3:1，1:1的氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗脱划段，得到Fr.A₁、Fr.A₂、Fr.B₁、Fr.B₂、Fr.C、Fr.D、Fr.E、Fr.F、Fr.G、Fr.H共10个部分；

（2）取Fr.A₁部分经C₁₈反相硅胶柱层析，10:90→100:0的甲醇-水，得到80%甲醇洗脱部分纯化得到化合物山楂酸；

（3）取Fr.B₁部分经C₁₈反相硅胶柱层析，10:90→100:0的甲醇-水，得到5%甲醇洗脱部分，过LH-20凝胶柱层析，甲醇洗脱后得到B1-2-3和B1-2-5两个主要部分，B1-2-3经半制备高效液相色谱纯化得到山奈酚、山萘酚-3-O-a-l-吡喃鼠李糖苷、Europetin和Europetin3-O-a-l-吡喃鼠李糖苷；B1-2-5经半制备高效液相色谱纯化得到(-)-儿茶素；

（4）取Fr.B₂部分和Fr.C部分合并后经C₁₈反相硅胶柱层析，10:90→100:0的甲醇-水，得到15%和20%甲醇洗脱部分，15%甲醇洗脱部分用半制备高效液相色谱纯化得到异槲皮苷；20%甲醇洗脱部分经LH-20凝胶柱层析得到槲皮素、杨梅素-3-O-a-l-吡喃鼠李糖苷和一个混合物，后者经半制备高效液相色谱纯化得到杨梅素；

（5）取Fr.D部分和Fr.E部分合并后经C₁₈反相硅胶柱层析，10:90→100:0的甲醇-水，得到40%甲醇洗脱部分，40%甲醇洗脱部分经LH-20凝胶层析柱得到槲皮素-3-O-a-l-吡喃鼠李糖苷；

其中，（3）所述B1-2-3的半制备高效液相色谱是用安捷伦1200液相色谱仪，UltimateAQ-C₁₈色谱柱，色谱柱大小4.6×300mm，洗脱剂为甲醇-水，含0.05%三氟乙酸，比例40:60，流速2mL/min；B1-2-5的半制备高效液相色谱是用安捷伦1200液相色谱仪，Ultimate AQ-C₁₈色谱柱，色谱柱大小4.6×300mm，洗脱剂为甲醇-水，含0.05%三氟乙酸，比例15:85，流速2mL/min；（4）所述15%甲醇洗脱部分的半制备高效液相色谱是用安捷伦1200液相色谱仪，Ultimate AQ-C₁₈色谱柱，色谱柱大小4.6×300mm，洗脱剂为甲醇-水，含0.05%三氟乙酸，比例15:85，流速2mL/min；20%甲醇洗脱部分的半制备高效液相色谱是用安捷伦1200液相色谱仪，Ultimate AQ-C₁₈色谱柱，色谱柱大小4.6×300mm，洗脱剂为甲醇-水，含0.05%三氟乙酸，比例30:70，流速2mL/min。