[发明专利]一种鸡产蛋下降综合症病毒双抗体夹心ELISA检测方法

摘要

本发明公开了一种鸡产蛋下降综合症病毒双抗体夹心ELISA检测方法，具体步骤如下：（1）使用EDS76作为抗原对产蛋鸡和雄性健康成年兔进行免疫，制备鸡抗EDS76血清和兔抗EDS76血清；（2）提纯鸡抗EDS76血清和兔抗EDS76血清中的抗EDS76免疫球蛋白，制得鸡抗EDS76免疫球蛋白和兔抗EDS76免疫球蛋白；（3）ELISA检测步骤；（4）临界值的确定：取X+3S=0.331作为判定的临界值。本发明既克服了传统方法操作繁琐、耗时费力、检出率低等缺点，又解决了只检查抗体不检查病毒所造成持续性感染动物漏检的问题，其特异性、交叉试验和重复性试验结果表明，它是一种特异、敏感、快速、操作简便的方法。

主权项

1.一种鸡产蛋下降综合症病毒双抗体夹心ELISA检测方法，其特征在于：具体步骤如下：（1）使用EDS76作为抗原对产蛋鸡和雄性健康成年兔进行免疫，制备鸡抗EDS76血清和兔抗EDS76血清；（2）提纯鸡抗EDS76血清和兔抗EDS76血清中的抗EDS76免疫球蛋白，制得鸡抗EDS76免疫球蛋白和兔抗EDS76免疫球蛋白；（3）ELISA检测步骤：a. 将鸡抗EDS76免疫球蛋白用包被液稀释，100 μL/孔，37 ℃下包被120 min；b. 甩弃液体，洗涤液洗板3次，拍干，每孔加封闭液 100 μL封闭60 min；c. 甩弃液体，洗涤液洗板3次，拍干，每孔加待检样品100 μL，37℃下作用60 min；d. 甩弃液体，洗涤液洗板3次，拍干，每孔加稀释好的兔抗EDS76免疫球蛋白100 μL，37℃下作用60 min；e. 甩弃液体，洗涤液洗板3次，拍干，每孔加稀释好的HRP标记的羊抗兔的酶标抗体100 μL，37℃作用90 min；f. 甩弃液体，洗涤液洗板5次，拍干，每孔加TMB显色液100 μL，37℃避光作用10 min；g. 每孔加终止液100 μL，小心混匀，用酶标仪测OD450值；（4）临界值的确定用步骤（3）所述的ELISA检测步骤测定30份阴性样品的OD450值，计算测得平均值X为0.280，标准差S=0.017，取X+3S=0.331作为判定的临界值，当被检样品的OD450值≥X+3S时，则判断其为阳性，当被检样品的OD450值＜X+3S时则是阴性。