[发明专利]免疫亲和净化-液相色谱串联质谱测定贝类中腹泻性贝类毒素的方法

摘要

本发明公开了一种免疫亲和净化‑液相色谱串联质谱测定贝类中腹泻性贝类毒素的方法，样品采用80％甲醇水溶液提取，经磷酸盐缓冲液混合稀释后，免疫亲和选择专一净化，液相色谱串联质谱分析。根据腹泻性免疫亲和柱的使用特性，对上样液、淋洗液、洗脱液等参数进行了优化；电喷雾负离子电离，多反应监测模式，外标法定量。本发明基质干扰小、净化效果强、灵敏度高，适合贝类中腹泻性贝类毒素的分析测定。

主权项

1.一种免疫亲和净化-液相色谱串联质谱测定贝类中腹泻性贝类毒素的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)样品前处理：准确称取已充分均质样品2.00g于50mL具塞离心管中，加入10mL 80％甲醇水溶液，涡旋振荡2min，超声提取10min，7000r/min离心5min，将上清液移至另一50mL离心管中；再往剩余残渣中加入10mL 80％甲醇水溶液，重复提取一次，合并提取液；移取5mL合并的提取液至另一50mL离心管中，加入20mL PBS缓冲液进行稀释，待净化；(2)免疫亲和柱净化：取出免疫亲和柱，待其恢复至室温后去掉亲和柱堵头，放出柱内保存液后，上样品液，上样结束后，用6mL 20％甲醇水溶液淋洗亲和柱，挤干柱内残留液，并弃去以上全部流出液，最后用3mL含有2％氨水的甲醇溶液洗脱，收集的洗脱液于50℃氮气吹干，用1mL初始流动相定容溶解，经0.22μm滤膜过滤后得净化液供液相色谱-质谱分析；(3)液相色谱-质谱分析：净化液经液相色谱-串联质谱仪测定获得腹泻性贝类毒素的峰面积，将峰面积代入标准曲线分析计算，从而获得样品中腹泻性贝类毒素的含量；色谱柱：ACQUITYTMUPLC BEH C18柱，规格：2.1mm×100mm，1.7μm；进样体积10μL；样品室温度4℃；柱温30℃；流速0.3mL/min；流动相A为2mmol/L乙酸铵溶液，B为乙腈，梯度洗脱：0～3.0min，70％～25％A；3.0～3.5min，25％～70％A；3.5～5.0min，70％A。