[发明专利]一种用于线虫蛋白质定量和示踪的N15稳定同位素标记方法

摘要

本发明公开了一种用于线虫蛋白质定量和示踪的N15稳定同位素标记方法，首先，利用酵母将N15无机盐转化成生物蛋白，当酵母培养代数达到6代以上，其提取蛋白98％以上都是N15的蛋白，再将酵母磨碎，制成含N15的菌体蛋白粉末，利用含N15的菌体蛋白粉末取代常规的N14蛋白，用于培养多种线虫或线虫的共生菌体，为线虫蛋白质标记定量和示踪提供特异性的N15同位素标记。本发明方法应用于线虫的蛋白质定量分析，操作简便，试验成本低，试验周期短，利于人们高效、低成本对大量样品进行蛋白质组分析。

主权项

一种用于线虫蛋白质定量和示踪的N15稳定同位素标记方法，其特征在于：首先，利用酵母将N15无机盐转化成生物蛋白，当酵母培养代数达到6代以上，其提取蛋白98％以上都是N15的蛋白，再将酵母磨碎，制成含N15的菌体蛋白粉末，利用含N15的菌体蛋白粉末取代常规的N14蛋白，用于培养多种线虫或线虫的共生菌体，为线虫蛋白质标记定量和示踪提供特异性的N15同位素标记；其包括以下步骤：1)按照以下配方配制只含N15的无机培养基：在1升的蒸馏水中，包含以下按质量百分比计的组分：2)使用高压灭菌锅，将步骤1)中的培养基灭菌；3)待步骤2)中的培养基冷却至室温后，挑取单菌落酵母菌接种在培养基中培养；4)待酵母菌培养代数达到6代以上，取出培养基进行离心，离心后舍去上清液，保留菌体沉淀；5)倒入无菌生理盐水清洗菌体，离心，舍去上清液，得到酵母泥；6)酵母泥称重后，用无菌水配制成酵母液，使其自溶；7)自溶结束后，使用超声仪破碎细胞，然后在酵母液中加入蛋白酶进行酶解；8)酶解结束后，将酵母液加热灭酶活；9)将酵母液再次离心分离，得到上清液，舍去沉淀；10)酵母上清液先预冻，凝结成固体后，再放入冷冻干燥机中干燥得到N15酵母蛋白粉末；11)N15线虫饲料的配制：根据线虫的营养方式，选择不同的饲料配方，若所要培养的线虫能够直接从环境中摄取营养物质，则将步骤10)中制成的N15酵母蛋白粉末作为饲料的基本原料，取代常规的N14蛋白用于培养，再加入不含N的无机盐物质，制成最终的N15线虫饲料；若所要培养的线虫需要共生菌体或摄食微生物，则能够用步骤10)中制成的N15酵母蛋白粉末制成微生物培养基，培养出含N15特异性标记的微生物，再以此为线虫蛋白质标记定量和示踪提供特异性的N15同位素标记。