[发明专利]马铃薯原生质体的高效分离、转化及再生的方法及其专用培养基

摘要

本发明公开了一种马铃薯原生质体的高效分离、转化及再生的方法及其专用培养基，以马铃薯试管苗茎段为起始材料，经过诱导及3次继代培养获得生长旺盛、结构疏松的胚性愈伤组织进行悬浮培养，采用纤维素酶、果胶酶和离析酶，对马铃薯悬浮细胞进行消化并利用密度梯度沉降的方法分离原生质体，获得了高纯度的原生质体。通过聚二乙醇介导将目的基因导入马铃薯原生质体基因组中，经液体浅层培养以及后续分化再生，培育出了大量马铃薯转基因植株。

主权项

一种用于马铃薯原生质体的高效分离、转化及再生的专用培养基，其特征在于，包括以下培养基,所有配方中，水为溶剂：1)诱导培养基：pH值为5.2‑6.0，每1L中含有以下组分：2)继代培养基：pH值为5.2‑6.0，每1L中含有以下组分：3)悬浮培养基：pH值为5.2‑6.0，每1L中含有以下组分：4)酶解液：pH值为5.2‑6.0，每1L中含有以下组分：5)细胞洗液：pH值为5.2‑6.0，每1L中含有以下组分：CPW盐                         1.85g甘露醇                        60g6)FDA染液：5mg FDA溶于1mL丙酮中；7)转化液：pH值为5.2‑6.0，每1L中含有以下组分：甘露醇                        91g氯化镁                        14.25g乙磺酸                        1.0g8)含有聚乙二醇PEG的溶液：pH值为8.0，每1L中含有以下组分：聚乙二醇PEG                   40g甘露醇                        72.9g硝酸钙                        16.4g9)原生质体培养基：液体原生质体培养基：pH值为5.2‑6.0，每1L中含有以下组分：VKM培养基： 固体原生质体培养基：pH值为5.2‑6.0，每1L中含有以下组分：VKM培养基： 10)固体分化培养基：pH值为5.2‑6.0，每1L中含有以下组分：