[发明专利]基质金属蛋白酶13的纯化与复性方法

摘要

本发明公开了一种基质金属蛋白酶13的纯化与复性方法，首先进行重组大肠杆菌的发酵与目标蛋白的诱导表达，然后进行破菌，包涵体洗涤、溶解得到含有基质金属蛋白酶13的抽提液，对此抽提液使用Ni2+‑亲和色谱进行纯化，然后使用DEAE阴离子交换色谱或Desalting尺寸排阻色谱进行复性。本发明操作简单，耗时短，每升发酵液能够得到更多的活性蛋白，降低了生产成本，MMP‑13售价从目前120元/μg降低到8~10元/μg。

主权项

基质金属蛋白酶13的纯化与复性方法，其特征在于：首先进行重组大肠杆菌的发酵与目标蛋白的诱导表达，然后进行破菌，包涵体洗涤、溶解得到含有基质金属蛋白酶13的抽提液，对此抽提液使用Ni2+‑亲和色谱进行纯化，具体为先用平衡缓冲液平衡色谱柱至基线平稳后进样，继续用平衡缓冲液以1.0mL/min的速度冲洗至基线平稳，然后换洗脱液以1.0mL/min的速度洗脱结合在柱子上的蛋白，平衡缓冲液为20mM咪唑，20mM Tris‑HCl，0.5M NaCl，8M尿素，洗脱液为100mM 咪唑，20mM Tris‑HCl，0.5M NaCl，8M尿素，pH均为7.5；然后使用DEAE阴离子交换色谱进行复性，具体为先用结合缓冲液平衡色谱柱至基线平稳后进样，继续用结合缓冲液以1.0mL/min的速度冲洗至基线平稳，然后换洗脱液以1.0ml/min的速度梯度洗脱，在20min内，使洗脱液由0%上升到100%，结合缓冲液为20mM Tris‑HCl，1mM EDTA‑Na2，5M尿素，pH为8.0，洗脱液为20mM Tris‑HCl，1mM EDTA‑Na2，1M NaCl，pH为7.0。