[发明专利]一种连续培养枯草芽孢杆菌的方法及专用的发酵系统

摘要

本发明属于微生物领域，具体涉及一种枯草芽孢杆菌的连续培养方法和专用的发酵系统。本发明的方法包括下述步骤：(1)将保存的枯草芽孢杆菌菌种转接到试管斜面培养基上，进行菌种活化，然后依次转接到三角瓶和种子罐进行培养，制备枯草芽孢杆菌种子；(2)取培养料：淀粉、玉米粉、豆粕粉、蛋白胨、NaCl、CaCl₂、MgSO₄·7H₂O、KH₂PO₄、K₂HPO₄、MnSO₄、消泡剂、水；(3)将步骤(2)中的培养料经灭菌处理后，接种活化、培养好的枯草芽孢杆菌种子，再经过三级连续培养，得发酵液。本发明的方法所培养的枯草芽孢杆菌的质量和品质比较稳定均一，不易发生杂菌污染和菌种变异；延长各检测仪器的寿命；节省时间、提高了产量和生产效率；提高了枯草芽孢杆菌菌体浓度和芽孢率。

主权项

1.枯草芽孢杆菌的连续培养方法，包括下述的步骤：(1)种子培养a.试管斜面菌种活化将保存的枯草芽孢杆菌菌种转接到试管斜面培养基上，保持33℃，培养30小时进行菌种活化；所述的试管斜面培养基配方为：葡萄糖4g/L，蛋白胨3g/L，NaCl1g/L，牛肉膏0.5g/L，琼脂20g/L，pH7.1，121℃灭菌20分钟；b.三角瓶种子培养从活化好的试管中挑取1‑2环枯草芽孢杆菌菌种接种到三角瓶中，接种后保持33℃， 120rpm，培养17小时；所述的三角瓶培养基配方为：葡萄糖20g/L，蛋白胨15g/L，NaCl5g/L，牛肉膏0.5g/L， pH7.1，121℃灭菌30分钟；c.种子罐菌种培养将上述培养好的三角瓶菌种按0.8％接种量接种到种子罐中的培养料A中，培养温度31 ℃，通气量0.8(V/V•min)，转速120rpm，培养19小时；所述的种子罐培养料A配方为：葡萄糖20g/L，玉米粉5g/L，蛋白胨15g/L，牛肉膏0.5g/ L，NaCl 2.5g/L，CaCl₂ 1g/L，MgSO₄•7H₂O 1.2g/L，KH₂PO₄ 0.3g/L，K₂HPO₄ 0.7g/L，消泡剂 1g/L，pH7.0‑7.5，该培养料经连消装置灭菌后，输送至种子罐中；(2)取培养料B：培养料B配料为，淀粉20g/L，玉米粉5g/L，豆粕粉30g/L，蛋白胨5g/L， NaCl 2.5g/L，CaCl₂ 1g/L，MgSO₄•7H₂O 1.2g/L，KH₂PO₄ 0.3g/L，K₂HPO₄ 0.7g/L，MnSO₄ 5mg/ L，消泡剂1g/L，pH7.0‑7.5；(3)将步骤(2)中的培养料B在配料罐中混合均匀，送至连消装置灭菌，再输送至维持罐中，经过冷却装置冷却，将冷却后的培养料B输送至已灭菌处理的料液储罐中；培养料B从料液储罐中输入一级培养罐，输入培养料的量为一级培养罐总体积的80％，从种子罐接种0.5‑1％的种子到一级培养罐中，培养6‑10小时后，再次连续开始从料液储罐以恒定速度向一级培养罐中输入培养料B；所述的一级培养罐发酵培养的条件为，温度33‑35℃，搅拌桨转速150rpm，通风量0.6‑ 0.8(V/V•min)；同时以同样速度将经一级培养罐发酵所得的一级发酵液输入灭过菌的二级培养罐，待二级培养罐内的二级发酵液达到罐体总体积的80％后，开始以同样的速度将所得的二级发酵液输送至灭过菌的芽孢培养罐；所述的二级培养罐发酵培养条件为，温度33‑35℃，搅拌 桨转速200rpm，通风量0.8‑1.1(V/V•min)；待芽孢培养罐内发酵液达到罐体总体积的80％后，开始以同样的速度输出最终所得的发酵液，然后一直维持该系统的恒定连续发酵状态；所述的芽孢培养罐培养条件为，温度38‑40℃，搅拌桨转速150rpm，通风量0.6‑0.8(V/ V•min)；上述方法中所用系统：包括依次串联 连接的配料罐、连消装置、维持罐、冷却装置、料液储罐、一级培养罐、二级培养罐、芽孢培养罐；所述的冷却装置与一级培养罐之间并联有种子罐；所述的芽孢培养罐连接有辅料罐；所述的配料罐与连消装置之间连接有输送泵Ⅰ；所述的维持罐与冷却装置之间有输送 泵Ⅱ；所述的储料罐、一级培养罐、二级培养罐、芽孢培养罐之间均有恒流泵。