[发明专利]一种连续培养枯草芽孢杆菌的方法及专用的发酵系统

说明书

本发明属于微生物领域，具体涉及一种枯草芽孢杆菌的连续培养方法和专用的发酵系统。本发明的方法包括下述步骤：(1)将保存的枯草芽孢杆菌菌种转接到试管斜面培养基上，进行菌种活化，然后依次转接到三角瓶和种子罐进行培养，制备枯草芽孢杆菌种子；(2)取培养料：淀粉、玉米粉、豆粕粉、蛋白胨、NaCl、CaCl₂、MgSO₄·7H₂O、KH₂PO₄、K₂HPO₄、MnSO₄、消泡剂、水；(3)将步骤(2)中的培养料经灭菌处理后，接种活化、培养好的枯草芽孢杆菌种子，再经过三级连续培养，得发酵液。本发明的方法所培养的枯草芽孢杆菌的质量和品质比较稳定均一，不易发生杂菌污染和菌种变异；延长各检测仪器的寿命；节省时间、提高了产量和生产效率；提高了枯草芽孢杆菌菌体浓度和芽孢率。

技术领域

本发明属于微生物培养领域，具体涉及一种枯草芽孢杆菌的培养方法，还涉及上述的枯草芽孢杆菌的培养过程中专用的设备。

背景技术

枯草芽孢杆菌是在自然界广泛存在的一种好氧的产芽抱杆菌，它具有很强的脂肪酶、蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶等酶活性，代谢旺盛，对人畜无害，不污染环境。近几年，枯草芽孢杆菌作为一种安全、高效、多功能和极具开发潜力的微生物菌种已广泛应用于工业、农业、医药卫生、食品、畜牧业、水产及科研诸领域。

芽孢是细菌营养体在必需养料即将耗尽时，在细胞内形成的含水量极低、抗逆性极强的休眠体。很多研究表明，枯草芽抱杆菌所产生的芽孢具有耐热、耐旱、抗紫外线和有机溶剂等多种抗逆性，由于芽孢极强的抗逆性，在工业机械化生产及高温干燥的过程中，可以保证微生物菌剂的活性，提高其产品质量。目前，在工业生产过程中主要存在芽孢形成率不高、生产成本过高等问题。

因此，需要从培养工艺和培养设备上入手，发明一种高效培养枯草芽孢杆菌的方法，通过一种逐步改变培养条件的连续培养方式，提高枯草芽抱杆菌发酵过程中的芽孢数量，同时降低生产成本，实现枯草芽孢杆菌的高效生产。

发明内容

为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种高效生产枯草芽孢杆菌的设备；

本发明还提供了高效的培养枯草芽孢杆菌的方法，采用本发明的三级连续培养方法生产得到的枯草芽孢杆菌，其活菌数可达到100-130亿/mL，其芽孢率高达93％以上；

本发明的枯草芽孢杆菌的连续培养方法具体步骤如下：

(1)种子培养

a.试管斜面菌种活化

将保存的枯草芽孢杆菌菌种转接到试管斜面培养基上，保持32-35℃，培养24-36小时进行菌种活化；

试管斜面培养基配方为：葡萄糖4g/L，蛋白胨3g/L，NaCl 1g/L，牛肉膏0.5g/L，琼脂20g/L，pH7.0-7.5，121℃灭菌20分钟；

b.三角瓶种子培养

从活化好的试管中挑取1-2环菌种接种到三角瓶中，接种后保持32-35℃，100-150rpm，培养16-18小时；

三角瓶培养基配方为：葡萄糖20g/L，蛋白胨15g/L，NaCl5g/L，牛肉膏0.5g/L，pH7.0-7.5，121℃灭菌30分钟；

c.种子罐菌种培养

将上述培养好的三角瓶菌种按0.5-1％接种量接种到种子罐中的培养料A中，培养温度30-32℃，通气量0.5-1(V/V·min)，转速100-150rpm，培养18-20小时；