[发明专利]一种牡蛎疱疹病毒全基因组DNA富集方法

摘要

本发明公开了一种牡蛎疱疹病毒全基因组DNA富集方法，步骤如下1）组织样品匀浆；2）低速离心去除杂质；3）基因组DNA提取；4）长片段PCR扩增；5）PCR扩增产物检测。与现有技术相比，本发明的有益效果是本发明是以牡蛎疱疹病毒种内相对保守的基因序列为模板，设计23对长片段PCR用引物。这些引物可以特异性地覆盖牡蛎疱疹病毒全基因组，并被经过优化的长片段PCR反应体系和程序所扩增，完成对对牡蛎疱疹病毒基因组DNA富集的目的，克服了之前无法富集和纯化病毒基因组DNA的问题。同时，该方法不仅可以用于新鲜组织样本内牡蛎疱疹病毒基因组DNA的富集，也可以用于冷冻保存组织样本内牡蛎疱疹病毒基因组DNA的富集。

主权项

一种牡蛎疱疹病毒全基因组DNA富集方法，其特征在于：包括如下步骤：1）组织样品匀浆：取病贝外套膜和腮组织10‑15g，经过滤海水洗涤2‑5次，然后用剪刀剪碎组织；加入90‑135ml的灭菌海水，使用组织匀浆器匀浆组织；2）低速离心去除杂质：将步骤1）中得到组织匀浆液依次在250g、1000g和4000g离心力下离心；每次离心后去除沉淀，取上清液；3）基因组DNA提取：以步骤2）中上清液180µL为靶物质，使用DNA提取试剂盒，提取DNA作为长片段PCR扩增的模板；4）长片段PCR扩增：以步骤3）中提取得到DNA 1.0µL为模板，分别采用23对引物，在25µL体系中进行长片段PCR扩增；5）PCR 扩增产物检测：取步骤4）得到的PCR 扩增产物4.5µL，加入1.5µL 的上样缓冲液混合后，在浓度为0.8%的琼脂糖凝胶中，110伏电压下电泳50 min；凝胶成像系统观察并拍照，存在约10Kb的特异性条带，则确定成功扩增。