[发明专利]浮萍活体原生质体制备方法有效
| 申请号： | 201610911231.7 | 申请日： | 2016-10-19 |
| 公开（公告）号： | CN107964531B | 公开（公告）日： | 2019-08-27 |
| 发明（设计）人： | 杨琳;韩玉洁;刘文鑫;陆美伊;王家乐;吴迪;魏莹 | 申请（专利权）人： | 天津师范大学 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 天津创智天诚知识产权代理事务所(普通合伙) 12214 | 代理人： | 李蕊;王秀奎 |
| 地址： | 300387 *** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种浮萍活体原生质体制备方法，按照下述技术方案进行：调整Datko培养基的PH至5～6，进行高压灭菌；将浮萍培养于Datko培养基上，每周继代1～2次，得到浮萍植株；在25～28℃下将浮萍植株放入甘露醇溶液中至所述浮萍植株发生质壁分离；在酶解温度为23～27℃的条件下，用组织酶解液在黑暗条件下酶解所得的浮萍植株25～30min，每间隔10～15min吹打混匀一次，得到悬浮的浮萍活体原生质体，本发明的浮萍活体原生质体制备方法可在短时间获得浮萍活体原生质体，填补了浮萍活体原生质体制备方法的空白，具有取材少、耗时短、操作简单方便和获得的原生质体浓度高的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 浮萍 活体 原生质体制 浮萍植株 原生质体 培养基 酶解 原生质体浓度 甘露醇溶液 高压灭菌 黑暗条件 时间获得 质壁分离 酶解液 吹打 放入 混匀 继代 耗时 取材 悬浮 填补 | ||
【主权项】：
1.一种浮萍活体原生质体制备方法，其特征在于，按照下述步骤进行：步骤1，调整Datko培养基的PH至5～6，于95～105kPa、120～125℃下进行高压灭菌；所述Datko培养基由水和下述浓度的化合物组成：![]()
步骤2，采集浮萍，将浮萍培养于步骤1所述的Datko培养基上，每周继代1～2次，得到浮萍植株；其中，培养条件为：温度18～25℃，光周期16～18小时/天，光强95～97μmol m‑2s‑1；步骤3，在25～28℃下将步骤2中所述浮萍植株放入甘露醇溶液中至该浮萍植株发生质壁分离；其中，所述甘露醇溶液中甘露醇的体积浓度为10～13％；步骤4，在酶解温度为23～27℃的条件下，用组织酶解液在黑暗条件下酶解步骤3所得的浮萍植株25～30min，每间隔10～15min吹打混匀一次，得到悬浮的浮萍活体原生质体；所述组织酶解液由去离子水和下述浓度的化合物组成：![]()
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