[发明专利]一种从产朊假丝酵母细胞壁中提取β‑D‑葡聚糖的方法

摘要

本发明提供了一种从产朊假丝酵母细胞壁中提取β‑D‑葡聚糖的方法，包括一个获取产朊假丝酵母细胞的步骤；一个对产朊假丝酵母细胞进行诱导自溶的步骤，一个高温浸提的步骤，一个超声波破壁的步骤，一个高温抽提的步骤，一个脱脂的步骤，一个酶解去蛋白的步骤，已脱脂的粗品葡聚糖用磷酸缓冲液配成悬浮液，然后进行酶解，反应结束后，用水洗涤，离心，再加水使其充分混匀后加热灭酶，离心，冷冻干燥，得到β‑D‑葡聚糖产品。本发明避免了酸碱试剂等传统方法对产品带来的降解作用，是一种条件较温和的提取β‑葡聚糖的方法。同时，使用去蛋白的土豆汁作为产朊假丝酵母的培养基，可以减轻废弃土豆汁对环境的污染，对环境保护具有重要意义。

主权项

一种从产朊假丝酵母细胞壁中提取β‑D‑葡聚糖的方法，其特征在于包括以下步骤：1）一个获取产朊假丝酵母细胞的步骤，将产朊假丝酵母在去蛋白土豆汁中培养10‑14h，然后离心，再用去离子水冲洗，即得到产朊假丝酵母细胞；2）一个对产朊假丝酵母细胞进行诱导自溶的步骤，将步骤1）获得的产朊假丝酵母细胞加入到一个氯化钠溶液中，所述的氯化钠溶液的质量百分比浓度为2%‑5%，产朊假丝酵母细胞在氯化钠溶液中的质量百分比浓度为10%‑20％，在pH4.0‑pH7.0， 55‑60℃，100‑120rpm的条件下振荡自溶，时间为20h‑24h，自溶后离心，并用去离子水冲洗；3）一个高温浸提的步骤，将步骤2）获得产朊假丝酵母细胞加入pH6.0‑10.0的磷酸盐缓冲液中，在磷酸盐缓冲液中，酵母细胞的质量百分比浓度为10%‑15%，将产朊假丝酵母细胞悬浮，然后加入直径为0.5cm玻璃珠，料液比1：5‑1：15，进行高温浸提，浸提时间2‑8h、温度为80‑120℃、离心，用去离子水洗涤，获得富集沉淀；4）一个超声波破壁的步骤，用去离子水使步骤3）的富集沉淀悬浮，在600‑1000w功率条件下超声波破壁30min‑90min，然后在离心力为3000‑5000g，温度为4‑20℃下离心得细胞壁沉淀；5）一个高温抽提的步骤，将步骤4）获得产朊假丝酵母细胞壁加入pH6.0‑10.0的磷酸盐缓冲液中，在磷酸盐缓冲液中，酵母细胞壁的质量百分比浓度为10%‑20%，将产朊假丝酵母细胞壁悬浮，加入直径0.5cm玻璃珠，料液比为1：5‑1：15，高温抽提，抽提时间为2‑8h、温度80‑120℃、离心，沉淀用去离子水洗涤，得到沉淀；6）一个脱脂的步骤，将步骤5）的沉淀加入到无水乙醇溶剂中，进行反复萃取，得到去脂肪的葡聚糖粗品；7）一个酶解去蛋白的步骤，已脱脂的葡聚糖粗品用pH6.0‑10.0的磷酸缓冲液配成质量百分比浓度为10%‑20％的悬浮液，然后加入中性蛋白酶，加入后的中性蛋白酶的质量分数为0.1g/L‑1g/L，在50℃‑65℃的条件下进行酶解处理1‑5h，反应结束后，得到的沉淀用水洗涤，离心，再加水使其充分混匀后于100℃加热3‑8分钟灭酶，离心，冷冻干燥，得到淡黄色粉末即为β‑D‑葡聚糖产品。