[发明专利]一种利用镉米生产海藻糖的方法

摘要

合成序列为SEQ NO1金属亲和多肽BMP并展示在毕赤酵母表面构建BMP基因工程菌用于镉米降镉，合成序列为SEQ NO2的海藻糖合成酶TreS基因并构建基因工程菌用于生产海藻糖合成酶；镉米经磨浆、液化、压滤分离后得镉蛋白和液化糖浆，镉蛋白经蛋白酶分解得蛋白分解液，而液化糖浆加糖化酶后转化为麦芽糖浆；将构建的BMP基因工程菌加入到镉蛋白分解液中搅拌吸镉、离心分离后得吸镉酵母和大米蛋白肽；将该大米蛋白肽用作TerS基因工程菌的发酵培养基主成分，将其发酵扩培生产的菌液均质、破碎即得TreS粗酶液，将其加入到麦芽糖浆中进行催化反应，然后再进行相应处理，即可将镉米充分利用生产海藻糖。

主权项

一种利用镉米生产海藻糖的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：（1）将镉米浸泡1~3 h，磨成50~80目的米浆，加水调成20~40%（W/W）浓度的淀粉乳，调pH到6.1~6.5，按5~10U/g加α‑淀粉酶在90~110℃条件下分解20~60分钟，然后降温到55~65℃，用板框压滤机将其分离成镉蛋白与液化糖浆；（2）将上述（1）所得的镉蛋白以重量计加入1~3倍的水，加NaOH调pH到7~8，然后按1~3%（W/W）的比例加入蛋白酶搅拌4~8 h后，按2~6%（W/W）加入展示金属亲和肽BMP的毕赤酵母基因工程菌（简称BMP基因工程菌），振荡16~24 h吸附蛋白酶分解游离出来的镉，然后用离心机将其分离成吸镉酵母与脱镉大米蛋白肽，将脱镉大米蛋白肽冷冻干燥后用作海藻糖合成酶TreS基因工程菌（简称TreS基因工程菌）发酵培养基的主成分；（3）在上述（1）所述液化糖浆中按15~25 U/g的量加入β‑淀粉酶，糖化2~4h后，得麦芽糖浆；（4）将TreS基因工程菌按4~8%的接种量接入大米蛋白肽为主成分的培养基中，发酵培养至OD约为0.6时加入终浓度为0.5mmol/L的乳糖作为诱导剂，在22~26℃，200r/min诱导16~24 h，将发酵液经均质机破碎即为海藻糖合成酶粗酶液；（5）以重量计将5~10份（4）所述海藻糖合成酶粗酶液加入95~90份（3）所述的麦芽糖浆中，在pH4.5~7，42~52℃温度下进行催化反应2~8 h后过滤分离，将过滤分离后所得的反应液再经压滤、离交、色谱分离，所得的海藻糖浆经浓缩、干燥、结晶即得到结晶海藻糖，而色谱分离所得麦芽糖浆返回合并到（3）所述的麦芽糖浆中作为海藻糖生产原料。