[发明专利]一种消除PCR反应试剂自带的内源核酸污染的方法

摘要

本发明公开一种消除PCR反应试剂自带的内源核酸污染的方法。依据PCR反应原材料的来源，根据从NCBI数据库比对的结果确认潜在的污染片段。同时分析该污染片段，确定片段包含的限制性核酸内切酶位点。使用适宜的限制性内切酶对PCR反应液进行预先消化处理，当反应液中的内源核酸DNA被去除后，内源核酸DNA无法作为模板进行PCR扩增，使得反应结果排除因内源核酸DNA污染而产生的假阳性。本发明方法可消除内源核酸DNA对正常扩增所产生地影响，同时不阻碍正常地PCR扩增和特异性。

主权项

一种消除聚合酶链式反应体系原材料中自带的内源污染，防止PCR假阳性存在的方法，其特征在于，包括步骤：(1)、依据供货商提供的资料确定DNA聚合酶和dNTP的来源菌株，利用NCBI数据库，以来源菌株的种类为首选，对设计的引物进行序列比对，找寻潜在的结合位点，确认可能存在的污染片段；(2)、对污染片段进行酶切位点分析，找出序列中存在的限制性核酸内切酶，选取适宜的II型限制性核酸内切酶；(3)、将PCR反应体系在适宜的酶切温度下孵育一段时间，从而使得所述的限制性核酸内切酶完全消化反应体系中存在的内源核酸污染；(4)、灭活PCR反应体系中的所述II型限制性核酸内切酶，从而获得II型限制性内切酶被灭活的PCR反应体系。