[发明专利]金属硫蛋白的制备方法

摘要

本发明公开了一种金属硫蛋白的制备方法，属于生物技术领域。本发明将植物经金属盐水溶液进行诱导后再经汽爆处理，并在一定压力、温度、惰性气氛下分离提纯，用常温型α‑淀粉酶进行酶解最终得到金属硫蛋白成品。本发明选用小乔木、大叶作物、瓜秧等材料，经诱导后制备出高含量、高质量的金属硫蛋白，并且本发明采用在常温、高压下的汽爆方法，通过由内而外的冲击力冲破细胞壁，使细胞内容物（包含金属硫蛋白）全部“破壁而出”，利于下一步的分离操作，并应用了特殊的生物酶，保证了本发明对诱导植物利用的高效率、高质量、高收益。生产工艺简单、易于操作和技术推广。

主权项

一种金属硫蛋白的制备方法，其特征在于，包括步骤：A原料准备1）诱导植物：将诱导剂浇根或喷施于植物叶面，平均剂量控制在5—30毫克/千克干基植物；连用5—20天，隔天施用1次，每次剂量较上一次高0.3—3倍；2）将上述诱导后的植物经除杂、揉丝、切段、干燥、粉碎后置入汽爆罐中，粉末加入量达到罐体容积的5—40%，用空压机缓缓通入惰性气体排净罐内空气后封闭；不断加压至1—5MPa，保压20—120分钟；喷放到密封喷放仓，得汽爆粉末；充入惰性气体保存、备用；B金属硫蛋白的制备3）汽爆粉末入提取罐中，加入1—20倍体积的Tris‑HCl缓冲液，Tris‑HCl缓冲液的质量浓度为0.01~0.1mol/L，用空压机通入惰性气体，搅匀后，提取10—60分钟；4）将步骤3）中提取罐内的混合溶液离心分离，取上清；静置1—3小时，澄清处理，然后通过超滤、纳滤分离系统，得到分子量介于10000至15000道尔顿的金属硫蛋白粗液；5）将上述金属硫蛋白粗液移入酶解罐，加入常温型α‑淀粉酶，间歇1分钟，通入惰性气体1分钟；酶解10—80分钟；所述常温型α‑淀粉酶由微波诱导所得变异地衣芽孢杆菌分泌所得α‑淀粉酶，所述常温型α‑淀粉酶的适宜温度为22‑35℃；6）将步骤5）酶解后的液体移入冷冻离心机高速离心，取上清；7）将上清直接上Sephadex G‑50柱层析进行分离，以0.005~0.05 mol/L Tris‑HCl缓冲液进行洗脱，收集含金属硫蛋白组分的洗脱液；8）将步骤7）中收集的洗脱液进行真空浓缩，浓缩后的剩余部分用Tris‑HCl缓冲液洗涤1~5遍，重复本步骤，得金属硫蛋白；经干燥、粉碎后得金属硫蛋白成品。