[发明专利]烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱浓度的UPLC-MS/MS检测方法

摘要

本发明提供烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱浓度的UPLC‑MS/MS检测方法：包括以下步骤：（1）样品处理：称取烟叶样品粉末至10mL容量瓶中，加入甲醇3‑5ml进行提取，超声，再用甲醇定容至刻度，摇匀后取上清液过膜，得烟叶样品提取液。取烟叶样品提取液5μL进样UPLC‑MS/MS分析，或样品稀释100倍摇匀后取5μL进样UPLC‑MS/MS分析；（2）按照一定条件进行UPLC‑MS/MS检测；（3）根据样品的峰面积和标准曲线的回归方程中，计算烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱的浓度。本发明的有益效果是UPLC‑MS/MS检测方法检测烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱浓度，简单快捷，灵敏度高，抗干扰能力强，适合对烟草中生物碱类物质进行分析，以探索这些对人体的影响及质量控制。

主权项

1.烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱浓度的UPLC‑MS/MS检测方法：其特征在于：包括以下步骤：(1)样品处理：称取烟叶样品粉末至10mL容量瓶中，加入甲醇3‑5ml进行提取，超声，再用甲醇定容至刻度，摇匀后取上清液过膜，得烟叶样品提取液；样品不稀释：取烟叶样品提取液5μL进样UPLC‑MS/MS分析，主要用于降烟碱和亚硝基降烟碱含量测定，此时由于烟碱成分含量高，测定时，在烟碱出峰时间段不进行质谱采集；样品稀释100倍：取烟叶样品提取液0.1mL至10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀后取5μL进样UPLC‑MS/MS分析，主要用于烟碱含量测定；(2)HPLC‑MS/MS分析：将处理后的样品用三重四级杆液质联用仪，在以下条件下进行分析检测条件为：三重四级杆液质联用仪，液相条件：流动相：A:水，用氨水调pH至11.0          B:甲醇流速：0.3ml/min                        进样量：5μL柱温：45℃色谱柱：Waters ACQUITYBEH C18,1.7μm,2.1*50mm Column表1.梯度洗脱程序Time/minA％B％09553.510904.010904.019556955表2.质谱条件其他质谱参数：毛细管电压:3.2kV；                     源温度:120℃；脱溶剂气温度:350℃；                   脱溶剂气流量:800L/Hr；气帘气流量:50L/Hr；                    驻留时间：0.1s(3)根据样品的峰面积和标准曲线的回归方程中，计算烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱的浓度。