[发明专利]烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱浓度的UPLC-MS/MS检测方法

说明书

本发明提供烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱浓度的UPLC‑MS/MS检测方法：包括以下步骤：（1）样品处理：称取烟叶样品粉末至10mL容量瓶中，加入甲醇3‑5ml进行提取，超声，再用甲醇定容至刻度，摇匀后取上清液过膜，得烟叶样品提取液。取烟叶样品提取液5μL进样UPLC‑MS/MS分析，或样品稀释100倍摇匀后取5μL进样UPLC‑MS/MS分析；（2）按照一定条件进行UPLC‑MS/MS检测；（3）根据样品的峰面积和标准曲线的回归方程中，计算烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱的浓度。本发明的有益效果是UPLC‑MS/MS检测方法检测烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱浓度，简单快捷，灵敏度高，抗干扰能力强，适合对烟草中生物碱类物质进行分析，以探索这些对人体的影响及质量控制。

技术领域

本发明属于生物分析领域，尤其是涉及一种烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱浓度的UPLC-MS/MS检测方法。

背景技术

烟草中的生物碱主要以有机酸盐和无机酸盐的形式存在,主要有烟碱、降烟碱和新烟碱等。烟碱(又名尼古丁,nicotine)是烟草中生物碱的主要成分,在烟草中的含量一般为1％～2％,占烟草生物碱的95％,是导致人吸烟上瘾的主要因子。其化学名称为1-甲基-2-(2-吡啶基)吡咯烷[1～2]。烟碱也是烟气中最主要的生物碱,是主流烟气中具有毒性的粒相成分,中等剂量的烟碱能使人呼吸加快、血管舒张和呕吐明显加剧,稍高剂量的烟碱可引起震颤和痉挛。烟碱固然有害,但也有某些益处,如可使人得到安慰和快感,解除焦虑,调节情绪,平息激动和烦燥,增强记忆和技巧,降低肥胖的食欲,在脑内可模拟乙酰胆碱的作用,从而减轻帕金森综合症和老年性痴呆症等。因此,烟碱是评价烟叶品质的主要指标,也是衡量烟气质量的主要指标。

烟碱及其代谢物含量的高低不仅影响烟叶、烟制品和相关产品(如烟草香料、农药等)的质量,还关系到人体健康。所以,很多研究者不仅对烟草、卷烟、总粒相物和农药中的烟碱进行测定,而且还对唾液、头发、血液、尿、空气等中的烟碱及其代谢物的含量进行分析,以探索烟碱对人体的影响。

N-亚硝基降烟碱(NNN)，NNN是发现最早的一个烟草特有亚硝胺，并且在1977年报道了烤烟品Coker139中的NNN的平均含量为1.31mg/kg。烟草特有亚硝胺有致癌性，N-亚硝基降烟碱NNN致癌性最为强烈。所以对烟草中NNN的检测尤为重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种操作简单、检测效率高、成本低的烟碱、降烟碱和亚硝基降碱浓度检测方法，尤其适合对烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱浓度的检测。

本发明的技术方案是：

烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱浓度的UPLC-MS/MS检测方法：

(1)样品处理：

称取烟叶样品粉末至10mL容量瓶中，加入甲醇3-5ml进行提取，超声，再用甲醇定容至刻度，摇匀后取上清液过膜，得烟叶样品提取液。

样品不稀释：取烟叶样品提取液5μL进样UPLC-MS/MS分析，主要用于降烟碱和亚硝基降烟碱含量测定，此时由于烟碱成分含量高，测定时，在烟碱出峰时间段不进行质谱采集。

样品稀释100倍：取烟叶样品提取液0.1mL至10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀后取5

μL进样UPLC-MS/MS分析，主要用于烟碱含量测定。

(2)HPLC-MS/MS分析：将处理后的样品用三重四级杆液质联用仪，在以下条件下进行分析

检测条件为：三重四级杆液质联用仪，液相条件：

流动相：A:水，用氨水调pH至11.0 B:甲醇

流速：0.3ml/min 进样量：5μL