[发明专利]猪蓝耳病纯化疫苗及其制备方法

摘要

本发明涉及一种猪蓝耳病纯化疫苗及其生产方法。其中还涉及Marc‑145的全悬浮细胞株及其在制备猪蓝耳病疫苗中的应用。制备猪蓝耳病纯化疫苗，包括以下步骤：1)悬浮驯化获得Marc145的全悬浮细胞株；2)制苗用细胞的无血清悬浮培养；3)蓝耳病毒的培养及收获；4)病毒液纯化；5)疫苗的配置。采用本方法制备疫苗，解决了现有疫苗抗原含量低、血清残留和细胞残留等问题，可有效提高疫苗免疫效力，降低过敏反应。该方法使用无血清培养基全悬浮培养Marc‑145细胞生产猪蓝耳病毒，配合超滤设备对病毒进行浓缩、纯化，是简单、便宜、高效的纯化方法。

主权项

1.一种猪蓝耳病纯化疫苗的制备方法，其特征在于所述制备方法包括如下步骤：/n(1)细胞悬浮培养：将Marc-145细胞进行悬浮培养；/n(2)接毒方法：将猪蓝耳病毒种子培养液接入以上悬浮培养的细胞中，继续培养至收获时，收获培养病毒液；/n(3)将收获的病毒液采用中空纤维柱进行澄清、微滤、浓缩后，采用连续流蔗糖密度梯度离心或分子筛层析柱对滤液进行纯化；/n(4)采用灭活剂灭活纯化的病毒液后与佐剂混合配置灭活疫苗或者将纯化的病毒液与冻干保护剂混匀分装后经冻干制成活疫苗；/n所述Marc-145细胞为Marc-145猴胚胎肾上皮细胞系全悬浮适应株，简称Marc145-QLS株，是由猴胚胎肾上皮贴壁细胞Marc-145株经贴壁培养阶段的低血清驯化过程和低血清培养液悬浮驯化过程而获得，已于2016年8月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，登记编号为CGMCC NO.12697。/n