[发明专利]重组嗜酸乳杆菌S层蛋白在大肠杆菌中的高效表达及其应用

摘要

本发明公开一种引物对。本发明公开一种嗜酸乳杆菌ATCC 4356 S层蛋白基因。本发明还公开一种重组菌株。本发明还公开一种重组蛋白。本发明还公开重组质粒pGEXS的构建方法。本发明还公开上述重组蛋白的提取纯化方法。本发明还公开重组质粒pGEXS、重组菌株，重组蛋白在拮抗H9N2禽流感病毒侵袭树突状细胞中的应用。本发明还公开一种试剂盒。本发明构建的表达嗜酸乳杆菌ATCC 4356 S层蛋白的载体pGEXS中含有GST标签，从大肠杆菌中提取的S层蛋白与GST标签相连，可通过GST的柱子得到高度纯化的S层蛋白；与嗜酸乳杆菌ATCC 4356相比，重组大肠杆菌的S层蛋白表达产量更高，纯度达到95%。

主权项

1.重组质粒pGEXS、重组菌株、重组蛋白在制备拮抗H9N2禽流感病毒侵袭树突状细胞药物中的应用，其特征在于，所述重组质粒pGEXS是用限制性内切酶XhoI和BamHI将pGEX‑4t‑2质粒线性化，将线性化的pGEX‑4t‑2质粒与表达 嗜酸乳杆菌ATCC 4356 S 层蛋白的目的基因序列进行连接获得，所述重组菌株是重组质粒pGEXS导入大肠杆菌Rosetta‑gami2中即得，所述重组蛋白是将重组菌诱导表达得到菌体，将菌体加入PBS重悬离心，重悬液进行超声破碎，破碎后的得到的菌液离心，收集上清和沉淀进行SDS‑PAGE验证，将收集的上清过GST柱子，纯化提取得到S层蛋白即得。