[发明专利]一种提高维生素K2胞外分泌能力的方法在审
申请号: | 201610619244.7 | 申请日: | 2016-08-01 |
公开(公告)号: | CN106222208A | 公开(公告)日: | 2016-12-14 |
发明(设计)人: | 刘艳;薛正莲;王洲;章宁娟;胡刘秀;杨建伟;余飞;杨蒙;郑之明 | 申请(专利权)人: | 安徽工程大学 |
主分类号: | C12P7/66 | 分类号: | C12P7/66;C12N1/21;C12R1/20 |
代理公司: | 北京风雅颂专利代理有限公司11403 | 代理人: | 杨红梅 |
地址: | 241000 安*** | 国省代码: | 安徽;34 |
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摘要: | 本发明公开了一种提高维生素K2胞外分泌能力的方法,该方法通过分子生物学手段调节黄杆菌细胞膜脂肪酸的饱和度,提高了黄杆菌细胞膜通透性,解除了维生素K2胞内合成过程中中间代谢物和关键酶对其产生的反馈抑制,从而促进了维生素K2胞外分泌的能力,提高了维生素K2的总产量。本发明为维生素K2工业化生产提供了一条菌种改造的新思路,在食品、生物制药领域具有较大的实际应用价值和广阔的应用前景。 | ||
搜索关键词: | 一种 提高 维生素 k2 外分泌 能力 方法 | ||
【主权项】:
一种提高维生素K2胞外分泌能力的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:a、提取向日葵全基因组;b、以硫酯酶基因为目的基因设计引物对,对向日葵全基因组进行PCR扩增目的基因片段;c、将目的基因片段与载体连接构建用于表达硫酯酶活性的表达载体;d、表达载体转化黄杆菌,并利用表达载体上的抗性基因筛选转化子,将筛选到的转化子转接到斜面培养基;e、从斜面培养基上挑取菌落在种子培养基上进行培养基因改造菌;f、将基因改造菌接入发酵培养基中发酵培养后,经离心分离获得含有维生素K2的菌体和发酵上清液。
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- 1,4-萘醌类化合物的合成方法,具体包括如下步骤:将对苯二酚类化合物溶解于DMSO中,加入缓冲液,混匀,通氧气;然后加入1-乙酰氧基-1,3-丁二烯,混匀;加入吩噁嗪酮合成酶粗酶液,在30~55℃水浴中进行反应,反应12~24h;反应结束后经萃取、干燥、减压蒸馏、硅胶层析柱分离得到1,4-萘醌类化合物。其中缓冲液为pH4~6的乙酸-乙酸钠缓冲液;吩噁嗪酮合成酶粗酶液的用量按照每克对苯二酚类化合物Ⅱ加入100~3000U。本发明采用吩噁嗪酮合成酶为催化剂,工艺简单、操作平稳、条件温和、选择性高,产率在75~95%之间,且环境友好。
- 一种辅酶Q10工业化生产方法-201010601223.5
- 吴轶;陈必钦;詹光煌;朱友跑 - 内蒙古金达威药业有限公司;厦门金达威集团股份有限公司
- 2010-12-23 - 2011-08-31 - C12P7/66
- 本发明公开了一种辅酶Q10工业化生产方法,主要特点是根据辅酶Q10生物合成途径和代谢调控机制,选择合适的前体物和促进剂作为关键促进因子诱导辅酶Q10的积累,通过对种子、发酵培养基及辅酶Q10生物合成关键促进因子进行优化,有效地促进菌体生长,增大辅酶Q10代谢通量;采用三级发酵扩大培养及补料-分批培养。应用溶氧反馈-补料分批培养技术,通过溶氧反馈补糖、中间变速流加营养源料及连续流加磷水、氨水等策略实现对辅酶Q10的反馈调节,有效提高细胞密度,控制代谢流,并延长产物合成期,辅酶Q10发酵水平有了大幅度的提升,本生产工艺稳定,发酵成本大大降低。
- 利用大肠杆菌用于发酵生产甲萘醌-7的方法-201110036402.3
- 托马斯·施勒泽尔 - 瓦克化学股份公司
- 2011-02-11 - 2011-08-31 - C12P7/66
- 本发明涉及一种生产甲萘醌-7的方法,其特征在于大肠杆菌菌株的细胞含有枯草芽孢杆菌DSM 1088 hepS基因、枯草芽孢杆菌DSM 1088hepT基因和假定的枯草芽孢杆菌DSM 1088七异戊烯基转移酶(heptaprenyl transferase)基因,这些细胞在发酵培养基中发酵,同时甲萘醌-7在发酵的大肠杆菌菌株的细胞中累积。
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