[发明专利]BK病毒的检测方法、试剂盒及其应用

摘要

本申请公开了BK病毒的检测方法,包括如下步骤：采用磁珠法从人类尿液样本提取BKV DNA，获得待测样本；PCR扩增反应；采用荧光定量PCR仪检测反应结果，荧光信号收集时设定为Taqman荧光探针BKV‑FP5’端荧光基团对应的荧光素，在60℃收集荧光信号。本申请还公开了检测BK病毒的试剂盒。本发明的检测方法、试剂盒敏感性高，最低检出可达到500copies/mL；同时，本发明的检测方法的特异性很好，不和其他的病毒发生交叉反应，例如JC病毒(JCV)，丙肝病毒(HCV)，人巨细胞病毒(HCMV)和乙型肝炎病毒(HBV)。

主权项

BK病毒的检测方法,包括如下步骤：待测样本获取：采用磁珠法从人类尿液样本提取BKV DNA，获得待测样本；PCR扩增反应：将提取的BKV DNA加到PCR反应混合液中，进行PCR扩增；所述PCR反应混合液，包括：PCR反应液、BKV引物探针混合液，所述BKV引物探针混合液，包括，上游引物BKV‑F，下游引物BKV‑R，Taqman荧光探针BKV‑FP，纯化水；所述上游引物BKV‑F包含如SEQ ID NO:1所示的碱基序列；所述下游引物BKV‑R包含如SEQ ID NO:2所示的碱基序列；所述Taqman荧光探针BKV‑FP包含如SEQ ID NO:3所示的碱基序列,所述Taqman荧光探针BKV‑FP5’端有荧光报告基团，3’端有荧光淬灭基团；结果检测：采用荧光定量PCR仪检测反应结果，荧光信号收集时设定为Taqman荧光探针BKV‑FP5’端荧光基团对应的荧光素，在60℃收集荧光信号。