[发明专利]一种从西兰花中提取萝卜硫素的制备方法

摘要

本发明涉及一种从西兰花中提取萝卜硫素的制备方法，属于萝卜硫素领域。本发明首先通过对大肠杆菌进行变异处理，得到产硫代葡萄糖苷酶的大肠杆菌，再将变异大肠杆菌进行培养，然后对西兰花进行处理、超声提取，得到提取液，然后再通过酶解、加入氢氧化钠、正己烷等除去油脂、金属离子、蛋白质等杂质，得到葡萄糖萝卜硫素苷溶液，再将大肠杆菌进行发酵，向发酵液中加入葡萄糖萝卜硫素苷反应，再分别经过离心分离、CO₂超临界萃取、常压蒸馏、低温真空冻干，得到萝卜硫素。本发明制备的萝卜硫素产率高，纯度高，可应用于大规模生产中，并且生产时间较常规方法减少了6～8h，纯度达到了95%以上。

主权项

一种从西兰花中提取萝卜硫素的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）称取3～5g牛肉膏、10～15g蛋白胨、5～7g氯化钠加入到培养皿中，再加入700～800mL去离子水，搅拌10～20min，制成培养基，培养菌种；（2）选取10～20株大肠杆菌，用波长为280nm紫外线照射1～2h，选取其中的变异大肠杆菌接种到培养基上，再将培养基置于摇床中，在38～40℃下，振荡培养12～14h，将培养液放入5000～6000r/min离心机中离心分离10～20min，弃去上清液，得到变异大肠杆菌菌种，备用；（3）称取100～200g西兰花，置于80～90℃烘箱内干燥30～40min，再将干燥后的西兰花用粉碎机粉碎，得到干西兰花粉末，将西兰花粉末加入到烧杯中，向烧杯中加入200～300mL去离子水，并置于3000～3200W超声波萃取机上，控制温度在60～70℃，超声提取30～40min，过滤，得到提取液；（4）将上述提取液置于酶解罐中，同时向酶解罐中依次加入300～400mL去离子水、50～100mLpH为7.1～7.3磷酸盐缓冲溶液，搅拌30～40min，再向酶解罐中依次加入0.3～0.5g果胶酶、0.8～1.0g纤维素酶、1～3g半纤维素酶，控制酶解罐内温度为45～55℃，搅拌反应70～90min，反应结束，得到西兰花酶解液；（5）将上述西兰花酶解液放入5000～6000r/min离心机中离心分离10～20min，弃去下层杂质，得到西兰花酶解上清液，向上清液中依次加入50～70mL0.5mol/L氢氧化钠溶液、1～3g氯化锌，搅拌5～10min，过滤，得到滤液，向滤液中加入100～200mL正己烷，搅拌10～20min，静置，分液，得到水相，即葡萄糖萝卜硫素苷溶液；（6）向发酵罐中依次加入20%步骤（2）备用的变异大肠杆菌菌种、10～20g蛋白胨、3～5g酵母膏、100～200mLpH为7.2～7.4磷酸盐缓冲液、300～400mL去离子水，控制温度在30～40℃下，搅拌发酵10～12h，向发酵液中加入上述葡萄糖萝卜硫素苷溶液，保温搅拌反应40～60min，再将反应液离心分离10～20min，弃去下层杂质，得到萝卜硫素混合液；（7）将上述萝卜硫素混合液加入到CO₂超临界萃取仪中，控制萃取压力为20～30MPa，萃取温度为35～40℃，CO₂的流量为25～35kg/h，萃取10～20min，得到萝卜硫素溶液，将萝卜硫素溶液常温下减压蒸馏至膏状，再置于‑10～‑15℃真空冷冻干燥器内，冻干1～2h，得到淡黄色粉末，即萝卜硫素。