[发明专利]一种多重PCR快速检测稻曲菌交配型基因的方法

摘要

本发明属于农作物病原菌有性生殖类型鉴定领域，尤其涉及一种多重PCR快速检测稻曲菌交配型基因的方法，专用于检测稻曲菌有性生殖交配型基因,包括稻曲菌分离培养、制备稻曲菌基因组DNA保存备用、PCR扩增反应和凝胶电泳检测等步骤，具有操作简单、快速、灵敏度高的特点，有效提高稻曲菌交配型基因检测和交配型类型鉴定的准确度，且保证了扩增的特异性，提高了扩增效率，不会产生假阳性和非特异扩增。

主权项

一种多重PCR快速检测稻曲菌交配型基因的方法，其特征在于：包括以下步骤 ：（1）稻曲菌分离培养：在稻曲病发病高峰期，收集稻曲球样本，分离培养；（2）提取稻曲菌基因组DNA保存备用： 采用液氮研磨菌丝体，应用CTAB法提取各菌株DNA，得到的样品‑22‑‑18°C保存备用；（3）PCR扩增反应：以稻曲菌DNA为模版，在PCR反应体系中加入两对特异引物MAT1F1/MAT1R1、MAT2F1/MAT2R1进行扩增反应，质量浓度比为1：1，该两对特异引物的序列分别为：特异引物MAT1F1：5’‑CTT TGA GGT TGA GTT TCG TTC AGC‑3’，特异引物MAT1R1：5’‑CAT TTG AAA CCG ATA GAA GCG GG‑3’，特异引物MAT2F1：5’‑CCT CGC TGT ATT ATG GCA GTT TCT‑3’，特异引物MAT2R1：5’‑CCC CAC AAA AAG ACC GTC CCG GA‑3’；（4）凝胶电泳检测；PCR产物与10×PCR上样缓冲液混合，在加核酸燃料染色的3%琼脂糖凝胶中进行电泳，电泳后用紫外检测仪检测，如果扩增到两条核苷酸序列，则稻曲菌有性生殖为同宗配合，如果扩增到一条序列，则稻曲菌有性生殖为异宗配合。