[发明专利]体外培养富集CD8+T细胞的方法

摘要

本发明属于细胞培养领域，具体涉及一种体外培养富集CD8+T细胞的方法，更具体地，本发明涉及一种使用刺激物从人体外周血单个核细胞中大量定向扩增CD8+T细胞的方法。本发明的技术方案获得的T细胞增殖数量多、活力好、CD8+T细胞与CD4+T细胞之比可由正常生理状态的约12提高至2～51，同时目的培养物中，基于总的细胞数目，中枢记忆性T细胞的含量超过30％。

主权项

一种体外培养富集人CD8+T细胞的方法，包括以下步骤：(1)抽取人全血5～100ml并对其进行处理以获得分离的外周血单个核细胞；(2)对所述的分离的外周血单个核细胞进行分选，获得CD4+T细胞∶CD8+T细胞比率为1：1～1：5的T细胞悬液；(3)将所述的T细胞悬液接种到细胞培养板中的AIM‑V无血清细胞培养基里，在37℃、5％CO2和100％湿度条件下培养7～14天获得目的细胞悬液，其中所述的培养基中还分别添加有终浓度为300U/ml的IL‑2、终浓度为5～10μg/ml的CD3抗体以及终浓度为5～10μg/ml的CD28抗体；其特征在于，所述的细胞培养板是预包被有CD3抗体和CD28抗体的细胞培养板，所述的预包被有CD3抗体和CD28抗体的细胞培养板是通过下述方法制备的：将含有终浓度为5μg/ml的CD3抗体和终浓度为5μg/ml的CD28抗体的PBS缓冲液按照对于96孔板以100μl/孔或对于24孔板以500μl/孔的量加入到细胞培养板后4℃孵育过夜。