[发明专利]根癌农杆菌介导的荸荠秆枯病菌的遗传转化方法有效
| 申请号： | 201610538815.4 | 申请日： | 2016-07-08 |
| 公开（公告）号： | CN105969799B | 公开（公告）日： | 2019-06-21 |
| 发明（设计）人： | 颜梅新;江文;欧昆鹏;桂杰;董伟清;高美萍;何芳练;张尚文 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区农业科学院生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N15/84 | 分类号： | C12N15/84;A01H5/00 |
| 代理公司： | 广西南宁公平知识产权代理有限公司 45104 | 代理人： | 杨立华 |
| 地址： | 530007 广西壮族*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种根癌农杆菌介导的荸荠秆枯病菌的遗传转化方法，其特征在于以荸荠秆枯病菌分生孢子为转化受体材料，将含有双元载体的根癌农杆菌与荸荠秆枯病菌分生孢子混合后共培养，用抗生素筛选，获得抗性转化子，从而建立了荸荠秆枯病菌高效的遗传转化体系。该法操作简单、转化效率高且稳定性好，以此构建荸荠秆枯病菌突变体库，由农杆菌介导介导荸荠秆枯病菌的遗传转化获得的转化子可为筛选弱致病性和致病性缺陷的荸荠秆枯病菌菌株提供了丰富的筛选菌源，同时为克隆荸荠秆枯病菌致病性相关基因，深入研究荸荠秆枯病菌致病机理奠定基础。 | ||
| 搜索关键词： | 根癌农 杆菌 荸荠 病菌 遗传 转化 方法 | ||
【主权项】：
1.一种根癌农杆菌介导的荸荠秆枯病菌的遗传转化方法，其特征在于以荸荠秆枯病菌分生孢子为转化受体材料，将含有双元载体的根癌农杆菌与荸荠秆枯病菌分生孢子混合后共培养，用抗生素筛选，获得抗性转化子；所述含有双元载体的根癌农杆菌按以下操作准备：利用携带绿色荧光蛋白基因eGFP和潮霉素抗性筛选基因hpth的质粒pEV为转化载体，通过电击转化将质粒pEV载体转入农杆菌感受态细胞中；挑含有双元载体的根癌农杆菌菌体至5mL的MM液体培养液中，28℃，200rpm，培养过夜，用IM液体培养液将菌液稀释OD600至0.15左右，28℃下预诱导培养6h，使菌液OD600调至为0.5备用。
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