[发明专利]一种提高菊酯类降解酶表达量的方法有效
| 申请号： | 201610531523.8 | 申请日： | 2016-07-07 |
| 公开（公告）号： | CN106191002B | 公开（公告）日： | 2019-11-15 |
| 发明（设计）人： | 龙燕妮 | 申请（专利权）人： | 李芬 |
| 主分类号： | C12N9/18 | 分类号： | C12N9/18;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 431800湖北省荆门市*** | 国省代码： | 湖北;42 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明提供一种提高菊酯类降解酶表达量的方法。即通过制备生产菌种大肠杆菌E.coli BLR(DE3)/pET‑28a‑est825；种子培养；发酵培养：使用乳糖和异丙基硫代半乳糖(IPTG)的混合诱导溶液(摩尔浓度比为7:3)降温至30‑35℃开始诱导，诱导过程中继续流加甘油和酵母粉的混合补料液，维持发酵液中甘油的浓度为1‑2g/L，诱导的时间持续6‑7h；最后将菌体用含有0.005mol/L苯甲基磺酰氟的pH6.5‑7.0的磷酸盐缓冲液配制成质量浓度15％‑20％的菌悬液，超声破碎离心冻干后即得高酶活降解酶酶粉。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 提高 菊酯类 降解 表达 方法 | ||
【主权项】：
1.一种提高菊酯类降解酶表达量的方法，包括以下步骤：/n1)制备生产菌种大肠杆菌E.coli BLR(DE3)/pET-28a-est825；/n2)进行种子培养；/n3)进行发酵培养：当补料发酵培养至菌体的OD600nm值达到120-140时，一次性添加乳糖+异丙基硫代半乳糖(IPTG)的混合诱导溶液，使发酵液中上述混合诱导液的浓度为9-13g/L，所述乳糖与异丙基硫代半乳糖的摩尔浓度比为7:3，温度降至30-35℃开始诱导，诱导过程中继续流加甘油和酵母粉的混合补料液，维持发酵液中甘油的浓度为1-2g/L，诱导的时间持续6-7h；/n4)发酵结束后，在4-8℃的温度下离心收集菌体，将菌体用含有0.005mol/L苯甲基磺酰氟的pH6.5-7.0的磷酸盐缓冲液配制成质量浓度15％-20％的菌悬液，将菌悬液在4-8℃的温度下20KHz超声破碎，破碎液离心制得上清液，冻干即得酶粉。/n
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于李芬，未经李芬许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201610531523.8/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 同类专利
- 一种酯酶BSE00077及其编码基因和应用-201610021561.9
- 胡云峰;黄锦龙;梁甲元;孙爱君;张云 - 中国科学院南海海洋研究所
- 2016-01-12 - 2020-02-14 - C12N9/18
- 本发明公开了一种酯酶BSE00077及其编码基因和应用。本发明从芽孢杆菌(Bacillus sp.)SCSIO 15121中开发得到新的酯酶基因bse00077，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，全长为741bp，其编码的酯酶BSE00077的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，含有246个氨基酸；通过将克隆的酯酶基因bse00077在大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达后，得到了重组表达的酯酶BSE00077。该酯酶作为催化剂常温下可通过酯类水解反应催化制备(R)‑1‑苯乙醇，具有较好的稳定性，而且对部分表面活性剂及有机溶剂的具有很好的耐受性；可用于手性中间体的制备、洗涤剂、生物医药、化妆品和精细化工等领域。
- 一种表达微生物胆固醇酯酶的基因工程菌及其构建方法-201610021070.4
- 杨海麟;张玲;王武;辛瑜;张亚慧 - 江南大学
- 2016-01-13 - 2020-02-07 - C12N9/18
- 本发明公开了一种表达微生物胆固醇酯酶的基因工程菌及其构建方法，属于酶工程技术领域。本发明方法是将Burkholderia cepacia.源的胆固醇酯酶和胆固醇酯酶分子伴侣基因进行串联共表达，其中胆固醇酯酶基因和分子伴侣基因之间通过SD序列连接。本发明成功地表达了Burkholderia cepacia.源的胆固醇酯酶，并实现了Burkholderia cepacia.源的胆固醇酯酶的活性表达、高效表达。本发明构建的基因工程菌发酵的粗酶液中胆固醇酯酶酶活可达640U/L。
- 一种立体选择性酯酶、编码基因、载体、工程菌与应用-201910766503.2
- 章银军;张宏云;郑建永;汪钊 - 浙江工业大学
- 2019-08-20 - 2019-12-31 - C12N9/18
- 本发明提供了一种立体选择性酯酶、编码基因、载体、工程菌及其拆分(R,S)‑5‑氯‑2,3‑二氢‑2‑羟基‑1‑氧‑1H‑茚‑2‑羧酸甲酯的应用；利用重组大肠杆菌或重组酯酶为生物催化剂催化拆分(R,S)‑5‑氯‑2,3‑二氢‑2‑羟基‑1‑氧‑1H‑茚‑2‑羧酸甲酯，生成(S)‑5‑氯‑2,3‑二氢‑2‑羟基‑1‑氧‑1H‑茚‑2‑羧酸甲酯，转化率达55％左右，产物光学纯度都在97％以上。
- 一种酯酶EstP00714及其编码基因和应用-201610605466.3
- 胡云峰;公颜慧;马三梅;王永飞;张云 - 中国科学院南海海洋研究所
- 2016-07-27 - 2019-12-10 - C12N9/18
- 本发明公开了一种酯酶EstP00714及其编码基因和应用。本发明从假单胞菌(Pseudonocardia antitumoralis)HUP007中克隆得到一个酯酶基因EstP00714，全长为1146bp，其编码的酯酶EstP00714的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，含有381个氨基酸。本发明的酯酶EstP00714对多种金属离子、表面活性剂和有机溶剂都有很好的耐受性；该酯酶Estp00714可用于制备(S)‑扁桃酸甲酯，利用酯酶EstP00714作为催化剂，得到了底物对映体过量值95％以上的(S)‑扁桃酸甲酯。本发明与传统的化学拆分相比具有反应条件温和、无污染、对映体过量值高的优点。本发明的酯酶EstP00714可用于生物医药、化妆品和精细化工等领域，具有非常大的应用价值。
- 一种酯酶EstC10及其编码基因和应用-201610604813.0
- 胡云峰;公颜慧;马三梅;王永飞;张云;孙爱君 - 中国科学院南海海洋研究所
- 2016-07-27 - 2019-12-10 - C12N9/18
- 本发明公开了一种酯酶EstC10及其编码基因和应用。本发明从嗜热芽孢杆菌(Bacillussp.)CX01中克隆得到酯酶基因EstC10，全长为747bp，其编码的酯酶EstC10共包含248个氨基酸。将酯酶基因EstC10与表达载体pET‑28α(+)连接后转化大肠杆菌BL21(DE3)，培养并诱导表达后，得到了重组酯酶EstC10。酯酶EstC10能催化酯类水解、酯化和/或转酯化反应，酯酶EstC10作为催化剂拆分(±)‑2‑氯丙酸甲酯，可制备得到R‑2‑氯丙酸甲酯；酯酶EstC10作为催化剂拆分(±)‑乳酸甲酯，可制备得到D‑乳酸甲酯。
- 烟曲霉单宁酶突变体及其应用-201910724490.2
- 卢海强;谷新晰;陈伟;陈宝江;谷子林 - 河北农业大学
- 2019-08-07 - 2019-11-26 - C12N9/18
- 本发明公开了一种烟曲霉单宁酶突变体。所述突变位点为Kex2蛋白酶切割位点K315‑R316。本发明通过对单宁酶AfTanA中Kex2蛋白酶位点K315‑R316对酶性质的影响分析，明确该位点对于酶的催化效率和稳定性影响较大，双点的缺失突变AfTanΔKR单宁酶表现出更加优良的酶学特性，具有在食品工业中发挥巨大作用的潜力。
- 多肽，分离的其多核苷酸，以及包含多肽的添加剂、其用途及方法-201910861336.X
- S·弗鲁豪夫;M·萨姆海塞尔;M·费菲尔;D·摩尔;G·沙特兹迈尔;E·M·宾德 - 爱尔伯股份公司
- 2014-08-27 - 2019-11-26 - C12N9/18
- 以水解方式裂解玉米赤霉烯酮和/或至少一种玉米赤霉烯酮衍生物的多肽，其是具有选自SEQ ID No.1‑15的氨基酸序列或其功能性变体的水解酶，其中在所述功能性变体与至少一个所述氨基酸序列之间的序列同一性为至少40％；以及包含所述多肽的添加剂；以及编码所述多肽的分离的多核苷酸；以及用于用所述多肽来以水解方式裂解玉米赤霉烯酮和/或至少一种玉米赤霉烯酮衍生物的方法。
- 多肽，分离的其多核苷酸，以及包含多肽的添加剂、其用途及方法-201910861359.0
- S·弗鲁豪夫;M·萨姆海塞尔;M·费菲尔;D·摩尔;G·沙特兹迈尔;E·M·宾德 - 爱尔伯股份公司
- 2014-08-27 - 2019-11-26 - C12N9/18
- 以水解方式裂解玉米赤霉烯酮和/或至少一种玉米赤霉烯酮衍生物的多肽，其是具有选自SEQ ID No.1‑15的氨基酸序列或其功能性变体的水解酶，其中在所述功能性变体与至少一个所述氨基酸序列之间的序列同一性为至少40％；以及包含所述多肽的添加剂；以及编码所述多肽的分离的多核苷酸；以及用于用所述多肽来以水解方式裂解玉米赤霉烯酮和/或至少一种玉米赤霉烯酮衍生物的方法。
- 一种重组酯酶及其应用-201910574041.4
- 邱乐泉;吴石金;李骏;钟卫鸿;刘腾飞;尹辛格 - 浙江工业大学
- 2019-06-28 - 2019-11-22 - C12N9/18
- 本发明公开了一种重组酯酶及其在催化邻苯二甲酸酯制备邻苯二甲酸中的应用，所述重组酯酶氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。本发明重组酯酶可以降解多种PAEs底物，在30min内可将250mg/L的邻苯二甲酸二乙酯(DEP)完全催化为邻苯二甲酸(PA)，DBP可水解约96.8％，DMP可水解约46.4％，可应用于邻苯二甲酸酯污染的生物修复。
- 一种提高菊酯类降解酶表达量的方法-201610531523.8
- 龙燕妮 - 李芬
- 2016-07-07 - 2019-11-15 - C12N9/18
- 本发明提供一种提高菊酯类降解酶表达量的方法。即通过制备生产菌种大肠杆菌E.coli BLR(DE3)/pET‑28a‑est825；种子培养；发酵培养：使用乳糖和异丙基硫代半乳糖(IPTG)的混合诱导溶液(摩尔浓度比为7:3)降温至30‑35℃开始诱导，诱导过程中继续流加甘油和酵母粉的混合补料液，维持发酵液中甘油的浓度为1‑2g/L，诱导的时间持续6‑7h；最后将菌体用含有0.005mol/L苯甲基磺酰氟的pH6.5‑7.0的磷酸盐缓冲液配制成质量浓度15％‑20％的菌悬液，超声破碎离心冻干后即得高酶活降解酶酶粉。
- 一种磷脂酶B及其应用-201611206571.6
- 刘逸寒;路福平;李明杰 - 天津科技大学
- 2016-12-23 - 2019-11-15 - C12N9/18
- 本发明属于酶的基因工程技术领域，具体涉及通过易错PCR技术体外定向进化获得酶活提高的磷脂酶B突变体，及利用其制备甘油磷脂酰胆碱以及油脂脱胶的方法。得到磷脂酶B突变体PLBM，酶活较野生型磷脂酶B的酶活提高了25％。
- 专利分类
