[发明专利]快速测定囊泡病毒滴度的方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，具体而言，公开了一种用于囊泡病毒滴度的快速检测方法。该方法重悬对数生长期Sf9昆虫细胞；置培养箱中静置培养30分钟至细胞贴壁，弃上清培养基，换用新的Sf‑900IISFM培养基；利用血小球计数板测定细胞浓度；取Sf9昆虫细胞悬液与囊泡病毒稀释液混匀后接种至96孔细胞培养盘；置于培养箱中培养24小时后，每孔加台盼蓝染色液，统计每孔被染色细胞个数、总细胞个数。计算每孔Sf9昆虫细胞死亡率，每孔的死细胞率低于对照组的死细胞率，认定该孔被囊泡病毒侵染，反之则认为该孔未被病毒侵染，根据公式计算囊泡病毒的TCID₅₀。本发明测定囊泡病毒滴度的方法结合了细胞染色，可用于囊泡病毒滴度的快速测定，测定结果更为准确。

主权项

1.一种快速测定囊泡病毒滴度的方法，其特征在于：包括以下步骤：1)制备昆虫细胞悬液：将昆虫细胞置于Sf‑900II SFM液体培养基中进行培养，得到对数生长期的昆虫细胞，然后用Sf‑900II SFM液体培养基对昆虫细胞进行稀释，得到昆虫细胞悬液，2)制备待测囊泡病毒稀释液：将待测囊泡病毒使用Sf‑900II SFM液体培养基十倍梯度稀释备用；得到不同稀释度的待测囊泡病毒稀释液；3)制备细胞病毒悬液：将步骤2)得到的不同稀释度的待测囊泡病毒稀释液分别与步骤1)得到昆虫细胞悬液混合，得到不同稀释度的细胞病毒悬液；4)囊泡病毒侵染：将步骤3)得到不同稀释度的细胞病毒悬液接种至细胞培养盘内，置于细胞培养箱中培养24h；5)台盼蓝染色：取出上述细胞培养盘，并向细胞培养孔中滴加台盼蓝染色液染色，混合均匀，染色2～3分钟，在显微镜下计数每孔被染色的死细胞个数和细胞总个数；6)囊泡病毒滴度计算：根据每孔的死细胞个数和细胞总个数计算每孔细胞死亡率，即每孔细胞死亡率＝每孔死细胞个数/该孔细胞总个数，从而统计细胞培养盘中，每个稀释度细胞病毒悬液的侵染孔数；计算囊泡病毒的TCID₅₀。